[發明專利]一種用SPF雞制備TW1型雞傳染性支氣管炎病毒陽性血清的方法

有效

• 申請號: 201910598902.2
• 申請日: 2019-07-04
• 公開（公告）號: CN110467671B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 何海蓉;陳啟穩;刁小龍;印廣浩;張家銘;陳堅;顏文光
• 申請（專利權）人: 中崇信諾生物科技泰州有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/06
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所(普通合伙) 11305
• 代理人: 鄭明

本發明公開了一種用SPF雞制備TW1型雞傳染性支氣管炎病毒陽性血清的方法。使用特定基因型(TW1型)的IBV毒種。方法為，使用IBV CK/CH/XNGD/140株毒種及其油乳劑滅活疫苗，對50日齡的SPF雛雞進行基礎免疫和加強免疫，采血并分離血清；對血清進行無菌、外源病毒檢測、中和效價測定和特異性檢驗，獲得了特異性好、效價高的TW1型IBV陽性血清。本發明所述TW1型IBV陽性血清制備的方法，填補了TW1型IBV毒種無標準陽性血清的空白。選定了SPF雛雞作為制備血清的試驗動物，優化了血清制備過程中的免疫程序，提升了血清抗體中和效價。降低了生產成本，有利于陽性血清的批量制備。

技術領域

本發明涉及一種用SPF雞制備雞傳染性支氣管炎陽性血清的方法，屬于獸用生物制品技術領域。

背景技術

雞傳染性支氣管炎(Avian infection bronchitis)是由雞傳染性支氣管炎病毒(Avian infection bronchitis virus)引起的一種急性、高度接觸性傳染病，其主要侵害雞的呼吸系統、泌尿生殖系統和消化系統等。雞傳染性支氣管炎病毒(簡稱IBV)的基因組核酸在復制過程中易發生突變和重組，不同型毒株之間生物學特性、致病性和組織嗜性復雜多變，根據其免疫原性的差異可將IBV分為眾多的血清型，不同血清型IBV之間交叉保護性及血清中和效力相對較差，從而給疾病診斷和防治工作帶來極大困難。因此，針對特定基因型的IBV毒種研制檢測技術，對于快速有效診斷IBV的發生和流行具有重要意義。

根據現行《中華人民共和國獸藥典》(中國獸藥典委員會，中華人民共和國獸藥典，二〇一五年版三部，中國農業出版社，2015，以下稱《中國獸藥典》)三部的規定，IBV活疫苗成品或制作疫苗的毒種須用抗IBV特異性血清進行中和試驗，以檢驗外源病毒。本發明針對TW1型IBV毒種，研制其陽性血清的制備方法，為IBV毒種的鑒別分型、疫苗的效力及純凈性檢驗提供保障。

發明內容

本發明的目的在于通過SPF雞對TW1型雞傳染性支氣管炎病毒刺激所產生免疫反應獲得免疫抗體——陽性血清。

本發明技術方案：

1.一種用SPF雞制備TW1型雞傳染性支氣管炎病毒陽性血清，其特征在于該陽性血清是采用TW1型雞傳染性支氣管炎病毒CK/CH/XNGD/140株免疫SPF雛雞制備的；該株病毒已于2019年06月19日送交北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCC No.17997。

2.本發明所述一種用SPF雞制備TW1型雞傳染性支氣管炎病毒陽性血清，其特征在于該血清的的制備包括以下步驟：

(1)種毒鑒定 對IBV CK/CH/XNGD/140株種毒的純凈性及基因型進行檢測鑒定；

(2)制備滅活疫苗 使用IBV CK/CH/XNGD/140株毒種接種SPF雞胚，進行毒種擴繁；將擴繁好的雞胚尿囊液進行濃縮、滅活和乳化，制備出免疫用的TW1型IBV滅活疫苗；

(3)血清制備

1)免疫 使用IBV CK/CH/XNGD/140株毒種滴鼻點眼免疫50日齡的SPF雞。首免后14天，使用CK/CH/XNGD/140株毒種滴鼻點眼接種及其滅活疫苗頸部皮下、胸部肌肉注射加強免疫；二免后21天，使用CK/CH/XNGD/140株滅活疫苗加強免疫；三免后21天，使用滅活疫苗加強免疫。陽性血清制備過程共進行四次疫苗免疫；

2)采血 四免后14天，無菌采血；

3)分離血清 采用孵育、離心的方法分離血清，將分離的血清用0.22μm濾膜過濾，-20℃保存；

4)血清檢驗 對分離的血清進行無菌、支原體、外源病毒、血清中和效價測定和特異性檢驗，確定血清的純凈性、中和效力及特異性。