[發明專利]一種利用畢赤酵母菌制備抗菌肽T9W的方法在審
| 申請號： | 201910598800.0 | 申請日： | 2019-07-04 |
| 公開（公告）號： | CN110438139A | 公開（公告）日： | 2019-11-12 |
| 發明（設計）人： | 單安山;馬秋元 | 申請（專利權）人： | 東北農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/66 | 分類號： | C12N15/66;C12N15/81;C07K7/08 |
| 代理公司： | 哈爾濱市哈科專利事務所有限責任公司 23101 | 代理人： | 吳振剛 |
| 地址： | 150030 黑龍江省哈爾濱市香*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 抗菌肽 畢赤酵母菌 畢赤酵母 驗證 基因序列克隆 重組表達載體 編碼抗菌肽 感受態細胞 陽性轉化子 表達宿主 表達載體 分泌表達 高效表達 化學合成 體外表達 表達量 雙酶切 誘導劑 測序 構建 質粒 制備 生產成本 發酵 轉入 保存 轉化 | ||
【權利要求書】：
1.一種利用畢赤酵母菌表達抗菌肽T9W的方法，其特征在于，方法如下：根據畢赤酵母的密碼子偏愛性對抗菌肽T9W的氨基酸序列進行人工設計編碼，編碼抗菌肽T9W的DNA序列如SEQ ID No.1所示，并在其5’端連接限制性核酸內切酶XbaI酶切位點和Kex2信號肽切割位點，3’端連接兩個終止密碼子TAA，在基因片段終端連接限制性核酸內切酶XhoI酶切位點，將該基因序列克隆到畢赤酵母表達載體pPICZαA中，構建重組表達載體pPICZαA-T9W經雙酶切及測序驗證，驗證正確后保存于E.coli Top 10，利用電轉化方法將重組載體直接轉化到表達宿主菌畢赤酵母菌X-33中，在誘導劑的作用下，實現抗菌肽的分泌表達。
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