[發明專利]一種利用室內培養皿體系建立向日葵列當寄生番茄的方法

在審

• 申請號: 201910589425.3
• 申請日: 2019-07-02
• 公開（公告）號: CN110393129A
• 公開（公告）日: 2019-11-01
• 發明（設計）人: 張鍵;趙君;柳慧卿;石勝華;王娜;劉志達
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: A01G22/00
• 分類號: A01G22/00;A01G22/05;A01G7/06;A01G9/029;A01C1/02
• 代理公司: 北京馳納智財知識產權代理事務所(普通合伙) 11367
• 代理人: 陳常美

本發明公開了一種利用室內培養皿體系建立向日葵列當寄生番茄的方法，包括以下步驟：（1）番茄品種的選擇；（2）種植番茄種子；（3）獲得向日葵根系的分泌物；（4）向日葵列當接種番茄；（5）向日葵列當種子的萌發率、寄生瘤結數的觀察和統計。本發明建立的向日葵列當高效寄生番茄的體系，能夠借助于番茄來研究向日葵中抗病候選基因的功能，并通過建立番茄與向日葵列當的“寄生橋”對列當的致病候選基因進行干擾來研究其功能。因此，本體系的建立為后續研究向日葵和列當互作的分子機制提供了新的途徑。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種利用室內培養皿體系建立向日葵列當寄生番茄的方法。

背景技術

向日葵列當(Orobanche cumana Wallr.)是列當科(Orobanchaceae)列當屬(Orobanche) 的一年生全寄生的被子植物，一個世紀以來對向日葵的生產造成了巨大的為害。列當寄生在寄主植物的根部，莖肉質，被有細毛，直立，圓柱形，高20～40cm，單生，少有分枝。葉退化成淡黃色鱗片狀，在莖上呈螺旋狀排列，不含葉綠素，不能進行光合作用制造有機物。當列當長勢良好時，它的基部是球狀的，在莖的上部三分之一處著生花序。由于列當無真正的根，不能從土壤中獲取養分，所以只能依賴其寄主提供營養。

目前，我國已發現有23種列當，常見的有向日葵列當(O.cumana)、分枝列當(O.aegyptiace)、彎管列當(O.cernua Loefling)、小列當(O.minor Sm)、大麻列當(O.ramosa L.)、鋸齒列當(O.crennata)。向日葵列當廣泛分布在東歐、南歐及中東地區，對西班牙、法國、捷克、匈牙利、羅馬尼亞、保加利亞、土耳其、塞爾維亞、烏克蘭、俄羅斯、以色列等國的向日葵生產造成了很大的威脅。我國1979年在吉林省首次發現向日葵列當，隨后列當在向日葵產區不斷蔓延。最新調查結果表明，向日葵列當在我國新疆、河北、北京、山西、內蒙古、黑龍江、吉林、陜西、青海和遼寧均有分布并造成危害，受害嚴重的地塊，株寄生率達72％～90％，已經成為繼菌核病后又一危害向日葵產業的因子。

研究向日葵與列當的互作的分子機制能夠有助于在分子水平簡析列當的侵入及向日葵對列當的防御機制。由于向日葵與列當的遺傳轉化體系的不成熟，從而極大的限制了在分子水平上簡析向日葵抗性機制以及列當的致病機理，因此可以考慮采用其他途徑研究其分子機制。

專利申請號為201410406892的發明專利公開一種快速鑒定向日葵抗列當水平的方法，該方法包括：制備接種物；用培養土和接種物制備培養器；在吸透水分的培養器內播種向日葵種子；室內培養，得到向日葵的觀察苗；觀察并記錄所述觀察苗的根系侵染列當的數量；根據所述觀察苗侵染列當的數量，鑒定向日葵抗列當的水平。本發明中由于用來鑒定抗列當水平的向日葵是長出8～10片真葉的向日葵幼苗，因此鑒定所需的培養向日葵的時間短、效率高，實現了對向日葵抗列當水平的快速鑒定，但是該專利也是采用向日葵和列當為研究客體，由于向日葵與列當遺傳轉化體系的不成熟，因此限制了在分子水平上簡析向日葵抗性機制以及列當的致病機理。

發明內容

針對上述現有技術存在的問題，本發明提供一種利用室內培養皿體系建立向日葵列當寄生番茄的方法，本研究建立的向日葵列當高效寄生番茄的體系，能夠借助于番茄來研究向日葵中抗病候選基因的功能，并通過建立番茄與列當的“寄生橋”對列當的致病候選基因進行干擾來研究其功能。因此，本體系的建立為后續研究向日葵和列當互作的分子機制提供了新的途徑。同時，本發明在之前的實驗中，建立了番茄的VIGS沉默體系，如圖1所示，具有成熟的番茄遺傳轉化及沉默體系。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案是：一種利用室內培養皿體系建立向日葵列

當寄生番茄的方法，包括以下步驟：

(1)番茄品種的選擇；

(2)種植番茄種子；

(3)獲得向日葵根系分泌物；