[發(fā)明專利]胃癌診斷及預(yù)后評估血液循環(huán)miRNA生物標(biāo)志物檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910588811.0
• 申請日: 2019-07-02
• 公開（公告）號: CN110229907A
• 公開（公告）日: 2019-09-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 牟永平;衛(wèi)星;王振飛;賀曉花;侯婧;田曉燕;米瀾;陳永霞
• 申請（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬人民醫(yī)院（內(nèi)蒙古自治區(qū)腫瘤醫(yī)院）
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 重慶市信立達(dá)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50230
• 代理人: 陳炳萍

本發(fā)明屬于試劑盒技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種胃癌診斷及預(yù)后評估血液循環(huán)miRNA生物標(biāo)志物檢測試劑，所述胃癌診斷及預(yù)后評估血液循環(huán)miRNA生物標(biāo)志物檢測試劑檢測方法包括：血清樣本的處理，采血、離心、保存?zhèn)溆茫豢俁NA的提取，提取得到的總RNA放于?80℃冰箱保存?zhèn)溆茫贿M(jìn)行吸光度檢測，利用RNA甲醛變性膠電泳判斷RNA的質(zhì)量；進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，將得到的cDNA進(jìn)行熒光定量檢測；采用相對定量法對檢測結(jié)果進(jìn)行分析。本發(fā)明與傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物CEA,CA199,CA724在診斷中的效能做了評估，優(yōu)于傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物，miR?30c的檢測適合作為為胃癌的診斷標(biāo)志物，并為胃癌診斷開發(fā)為新的腫瘤檢測標(biāo)志物診斷試劑盒，用于療效評價及預(yù)后判斷，具有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于試劑盒技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種胃癌診斷及預(yù)后評估血液循環(huán)miRNA生物標(biāo)志物檢測試劑盒。

背景技術(shù)

目前，業(yè)內(nèi)常用的現(xiàn)有技術(shù)是這樣的：

胃癌是消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤，在我國胃癌發(fā)病率和死亡率較高。據(jù)統(tǒng)計分析，2012年我國胃癌發(fā)病率為31.28/10萬，死亡率為22.04/10萬。胃癌發(fā)病多無明顯特異性的臨床表現(xiàn)且預(yù)后不良,五年生存率僅有20-30％，因此，尋找胃癌血清特異性標(biāo)志物用于胃癌的早期診斷及治療具有重要的意義。傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物CEA,CA199,CA724在胃癌中的診斷特異性與靈敏性不高。比如CEA合成部位在胎兒的胃腸和血液，主要在結(jié)直腸癌患者中表達(dá)，其他腫瘤包括胃癌，肺癌，肺癌，肝癌，乳腺癌，胰腺癌等腫瘤中也可表達(dá)，非惡性腫瘤病變?nèi)缒I衰，肺氣腫，直腸息肉，結(jié)腸炎時CEA表達(dá)可以升高，還會受到其他因素影響，如吸煙與唾液污染。microRNA是一類長度約為22個核苷酸的內(nèi)源性非編碼小分子RNA，能通過與靶標(biāo)mRNA 3’端非編碼區(qū)完全或部分互補(bǔ)結(jié)合引起靶mRNA降解或抑制其翻譯，從而對靶基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。microRNA作為癌基因或抑癌基因在腫瘤形成中扮演著重要作用，MicroRNA涉及一系列腫瘤生物過程包括腫瘤的增值，侵襲，轉(zhuǎn)移。

而微小核酸是一類在真核生物中發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性的非編碼RNA，其進(jìn)化上高度保守，通過與調(diào)控靶標(biāo)互補(bǔ)配對而在轉(zhuǎn)錄后水平對基因的表達(dá)進(jìn)行穩(wěn)定而精細(xì)的調(diào)節(jié)。由于miRNA血液中表達(dá)，由于其片段較短僅19-22個核苷酸，且受到RISC復(fù)合體的保護(hù)，不易降解具有高度的穩(wěn)定性，經(jīng)測試在反復(fù)凍融及pH值等劇烈變化的環(huán)境中保持穩(wěn)定能夠保持穩(wěn)定，因此是一種較為理想的腫瘤標(biāo)志物。

miRNA變化與腫瘤的密切關(guān)系已經(jīng)得到科學(xué)家的共識，形成了一個研究的熱點。胃癌是全球高發(fā)的惡性腫瘤之一，其中三分之一的胃癌在發(fā)現(xiàn)時已屬晚期，失去手術(shù)根治的機(jī)會，即使是手術(shù)根治的胃癌，60％-70％發(fā)生局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。臨床早期診斷率每增加1％，全球就有約76萬人免于死亡，中國約有16萬人可獲得新生，可挽回數(shù)以10億的損失。因此，推進(jìn)早期診斷技術(shù)的發(fā)展，具有非常緊迫的經(jīng)濟(jì)和社會意義。miRNA的表達(dá)譜及遺傳表達(dá)模式可能將發(fā)展成為新的生物學(xué)標(biāo)志，有助于實現(xiàn)腫瘤的早期診斷、來源分型及預(yù)后判斷。miRNA主要是在mRNA的水平上調(diào)節(jié)基因的表達(dá)，調(diào)節(jié)機(jī)制巧妙，因此miRNA用于基因功能研究，藥物靶點驗證，基因沉默、有目的的基因表達(dá)調(diào)控甚至用于基因治療，都具有廣闊前景。

綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)存在的問題是：傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物CEA,CA199,CA724在胃癌中的診斷特異性與靈敏性不高。

解決上述技術(shù)問題的難度：

由于腫瘤標(biāo)志物CEA,CA199,CA724在體內(nèi)合成部位的非特異性，導(dǎo)致其在多種腫瘤組織中表達(dá)。比如，CEA在其他非惡性腫瘤病變?nèi)缒I衰，肺氣腫，直腸息肉，結(jié)腸炎時CEA表達(dá)可以升高，還會受到吸煙與唾液污染因素影響而表達(dá)升高。CEA表達(dá)的為蛋白質(zhì)，由于其自身生物特性的原因，蛋白質(zhì)不夠穩(wěn)定，保存不當(dāng)易降解，也是導(dǎo)致這類腫瘤標(biāo)志物特異性與靈敏性不高的原因，臨床檢測中無法克服其弊端。因此需要繼續(xù)開發(fā)更理想的腫瘤標(biāo)志物。

解決上述技術(shù)問題的意義：