[發(fā)明專利]一種十字花科根腫病鑒定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910587695.0
• 申請日: 2019-07-02
• 公開（公告）號: CN110178579B
• 公開（公告）日: 2021-09-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 龐文星;王迎君;樸鐘云;李曉楠;戰(zhàn)宗祥
• 申請（專利權(quán)）人: 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01G7/06
• 分類號: A01G7/06;A01G9/029;A01G13/00;A01G24/12;A01G24/15;A01G24/42;A01G31/00;C12Q1/18;C12R1/645
• 代理公司: 西安銘澤知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61223
• 代理人: 李振瑞

本發(fā)明公開了一種十字花科根腫病鑒定方法，屬于根腫病鑒定方法技術(shù)領(lǐng)域，具體包括以下步驟：將十字花科植株采用育苗袋栽培方法進(jìn)行育苗；待植株長出一片真葉后采用注射法將根腫菌菌液注射至植株根部；植株生長期間，對植株噴灑營養(yǎng)液；待植株根部發(fā)病，進(jìn)行根腫病抗病性鑒定；本發(fā)明鑒定方法采用育苗袋法栽培、注射法接菌，操作簡單且植株發(fā)病率、病情指數(shù)最高，鑒定方法精確。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于根腫病鑒定方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種十字花科根腫病鑒定方法。

背景技術(shù)

根腫病是威脅十字花科植物的一種世界性土傳病害，該病是由蕓薹根腫菌(Plasmodiophora brassicae Woronin)侵染十字花科根部，引起薄壁組織細(xì)胞大量分裂增殖且增大，進(jìn)而根部逐漸形成腫瘤。根腫病專性寄生十字花科，我國主要種植的十字花科作物為大白菜，小白菜，結(jié)球甘藍(lán)，蘿卜，菜心等，根腫病的發(fā)生對十字花科作物造成非常嚴(yán)重的危害。

目前，國內(nèi)外對根腫病的研究越來越多，無論是抗病育種，還是根腫菌生理小種的鑒定，都需要對植株做根腫病性狀調(diào)查。而目前國內(nèi)外都是采用傳統(tǒng)的基質(zhì)栽培方法，這種方法在采樣，性狀調(diào)查時存在不易清洗，根部有基質(zhì)殘留，需要耗費大量的時間等問題。尤其是在大田清洗根部的污水無處排放，根腫菌的休眠孢子存活時間又長達(dá)20年，這樣會造成根腫菌污染的土地面積越來越多，對十字花科作物的危害也愈發(fā)嚴(yán)重。

根腫病鑒定過程中有效的接菌方法有很多，目前國內(nèi)外報道的方法有，插入法(Strelkov et al，2007)，菌土法(丁云花等，2005；胡靖峰等，2010)，注射法(Donald etal，2009)，浸根法(李茜等，2012)，浸芽法等(Cao et al，2009)，這些接菌方法有著各自的優(yōu)缺點，到目前為止尚未形成統(tǒng)一穩(wěn)定的接菌方法。

隨著根腫病在國內(nèi)外的發(fā)病面積越來越大，病情也越來越重，對根腫菌的研究是迫在眉睫的任務(wù)，而這些研究大多數(shù)都需要做根腫病性狀調(diào)查。為此，建立一個根腫病快速、精準(zhǔn)鑒定方法是非常重要的，這樣可以大大減輕試驗造成的污染，減少人力物力的浪費，從而為根腫菌的研究減輕更多的工作負(fù)擔(dān)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種十字花科根腫病鑒定方法，解決了傳統(tǒng)方法不易清洗，根部有基質(zhì)殘留，耗時長且結(jié)果準(zhǔn)確性差的問題，本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案來實現(xiàn)的。

本發(fā)明目的是提供一種十字花科根腫病鑒定方法，包括以下步驟：

將十字花科植株采用育苗袋栽培方法進(jìn)行育苗；待植株長出一片真葉后采用注射法將根腫菌菌液注射至植株根部；植株生長期間，對植株噴灑營養(yǎng)液；待植株根部發(fā)病，進(jìn)行根腫病抗病性鑒定；

所述育苗袋栽培方法為將十字花科植株采用陶粒、沙子和珍珠巖混合基質(zhì)，并配以噴灑營養(yǎng)液，進(jìn)行育苗。

優(yōu)選地，所述育苗袋栽培方法具體包括以下步驟：

把滅完菌的由泥炭、蛭石和珍珠巖混合組成的基質(zhì)A裝到育苗袋中，將基質(zhì)噴水慢慢潤濕，待基質(zhì)水分吸收后將種子播到基質(zhì)中，待種子發(fā)芽后，把植株定植到花盆中，花盆內(nèi)裝有滅完菌的粒徑分別為8～15mm的陶粒、沙子和珍珠巖按質(zhì)量比0.9～1.1:0.9～1.1:1組成的基質(zhì)B，植株生長期間噴灑營養(yǎng)液，以防幼苗干枯。

優(yōu)選地，所述注射法具體為：用移液器將菌液接菌到植株根部，每株的根腫菌懸浮液接菌量為1×10⁵～1×10⁸個孢子。

更優(yōu)選地，所述根腫菌懸浮液是由以下方法制得：

取發(fā)病根瘤用清水洗凈，室溫下進(jìn)行活化；在活化好的發(fā)病根瘤中加入無菌水，所述發(fā)病根瘤：無菌水用量比為2～4g：10mL，并用破壁磨菌機(jī)粉碎2～3次，過濾，合并濾液，充分搖勻；用血細(xì)胞計數(shù)板檢測搖勻后濾液中根腫菌孢子濃度，并根據(jù)檢測出的濃度用無菌水稀釋至1×10⁵～1×10⁸個孢子/mL，制得根腫菌懸浮液。