[發明專利]一種中和A型肉毒毒素的鼠源單抗及其應用

有效

• 申請號: 201910584470.X
• 申請日: 2019-07-01
• 公開（公告）號: CN110317268B
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 熊向華;張惟材;汪建華;呂孫慧;邱語進;傅楚溪;李磊;孫志杰
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C12N15/13;A61K39/40;A61P31/04
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 王灝增

本發明涉及生物技術領域，具體的說涉及一種中和A型肉毒毒素的鼠源單抗及其應用，所述中和A型肉毒毒素的鼠源單抗由輕鏈和重鏈組成，所述重鏈中的重鏈可變區中的CDR1、CDR2和CDR3的編碼基因依次為序列表的序列1自N末端第71?94位核苷酸、第151?171位核苷酸和第286?315位核苷酸；所述輕鏈中的輕鏈可變區中的CDR1、CDR2和CDR3的編碼基因依次為序列表的序列3自N末端第78?95位核苷酸、第147?155位核苷酸和第259?282位核苷酸。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體的說涉及一種中和A型肉毒毒素的鼠源單抗及其應用。

背景技術

肉毒毒素(botulinum toxin，BoNT)是由厭氧的肉毒梭菌(Clostridiumbotulinum)產生的一種蛋白類神經毒素，是迄今為止已知毒性最強的物質，可分為A-G七種血清型，A、B、E、F型能引起人類肉毒中毒，其中又以A型毒性最強且最為常見。肉毒毒素因其強毒性和易于生產被列為A類生物戰劑，目前食物和嬰兒肉毒中毒仍常有報道，且隨著BoNT/A在藥物和美容應用上越來越廣泛，因使用不當導致的肉毒中毒案例也越來越多。綜上所述，我們目前仍然時刻面臨著BoNT/A的威脅，其預防和治療理該引起廣泛重視。BoNT/A的預防采用接種疫苗的方式，但其治療目前尚無有效的小分子化學藥物，臨床上使用馬血清。

馬血清抗毒素存在病毒污染、過敏反應等風險以及制備成本高、生產期長、穩定性差等缺點。單克隆抗體親和力高、特異性強，取代馬血清成為臨床上治療藥物是必然的發展趨勢。

發明內容

本發明旨在獲得一種中和活性高的A型肉毒毒素的鼠源單抗，為A型肉毒毒素中毒治療和檢測奠定基礎。

本發明提供一種中和A型肉毒毒素的鼠源單抗，由輕鏈和重鏈組成，其特征在于，所述重鏈中的重鏈可變區中的CDR1、CDR2和CDR3的編碼基因依次為序列表的序列2自N末端第71-94位核苷酸、第151-171位核苷酸和第286-315位核苷酸；所述輕鏈中的輕鏈可變區中的CDR1、CDR2和CDR3的編碼基因依次為序列表的序列4自N末端第78-95位核苷酸、第147-155位核苷酸和第259-282位核苷酸。

其中，所述重鏈為序列表2所示的氨基酸序列，所述輕鏈為序列表4所示的氨基酸序列。

本發明還提供一種編碼所述的中和A型肉毒毒素的鼠源單抗的基因，編碼所述重鏈的基因為序列表1所述的核苷酸序列；編碼所述輕鏈的基因為序列表3所述的核苷酸序列。

所述的中和A型肉毒毒素的鼠源單抗在制備用于中和A型肉毒毒素的藥物中的應用也應在本發明的保護范圍之內。

本發明還提供一種用于中和A型肉毒毒素的藥物，所述藥物的活性成分包括中和A型肉毒毒素的鼠源單抗。

本發明還提供一種所述的中和A型肉毒毒素的鼠源單抗的人源化抗體。

所述的中和A型肉毒毒素的鼠源單抗的人源化抗體在制備用于中和、治療或者預防A型肉毒毒素的藥物中的應用也應在本發明的保護范圍之內。

本發明還提供一種用于預防A型肉毒毒素的藥物，所述藥物的活性成分包括中和A型肉毒毒素的鼠源單抗的人源化抗體。

本發明的A型肉毒毒素的鼠源單抗的中和活性能達到250LD₅₀/mg；故而僅需10μg抗體能完全保護4LD₅₀劑量BoNT/A的攻毒；在4LD₅₀的BoNT/A腹腔注射攻毒后不同時間點注射100μg抗體,攻毒后1h注射可起到完全保護的效果，攻毒后2h、4h注射可起到部分保護效果；對于4LD₅₀劑量腹腔注射攻毒，提前14d注射100μg抗體仍能起到完全保護的作用。擴增出抗體輕鏈和重鏈可變區基因，經IMGT軟件分析確定抗體輕重鏈CDR區。有利于A型肉毒毒素的鼠源單抗的進一步應用。