[發(fā)明專利]從石蠟包埋組織中提取RNA的方法及其試劑盒在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910579510.1 | 申請日： | 2019-06-28 |
| 公開（公告）號： | CN110317804A | 公開（公告）日： | 2019-10-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王守立 | 申請（專利權(quán)）人： | 蘇州堪賽爾生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 蘇州隆恒知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32366 | 代理人： | 周子軼 |
| 地址： | 215000 江蘇省蘇州市工業(yè)*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 石蠟包埋組織 石蠟切片 去除 樣本 微量離心管 石蠟 提取RNA 上清液 沉淀 水浴加熱 無水乙醇 二甲苯 試劑盒 風(fēng)干 放入 渦旋 切割 溶解 | ||
本發(fā)明公開了一種從石蠟包埋組織中提取RNA的方法，包括將石蠟包埋組織切割得到厚度為3?10μm石蠟切片樣本，并將所述石蠟切片樣本放入微量離心管中；在所述微量離心管中加入二甲苯，55℃水浴加熱3分鐘以溶解所述石蠟切片樣本中的石蠟，離心形成組織沉淀后去除上清液以去除石蠟；向組織沉淀中加入無水乙醇并渦旋，再離心后去除上清液；在室溫下風(fēng)干得到樣品。采用此種方式能夠從石蠟包埋組織中提取到品質(zhì)更高的RNA，提取到的RNA濃度更高，純度更良好。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及了生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種從石蠟包埋組織中提取RNA的方法及其試劑盒。
背景技術(shù)
自沃森、克里克的DNA雙螺旋模型誕生，生物學(xué)進入到了一個全新的時代，對DNA和RNA的提取成為生物醫(yī)藥領(lǐng)域甚至農(nóng)林牧漁等領(lǐng)域內(nèi)所有學(xué)科科學(xué)研究的基礎(chǔ)。近10年來，隨著基因診斷、轉(zhuǎn)基因食品檢測、個性化醫(yī)療等的快速發(fā)展，現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)越來越廣泛地被用于人類疾病研究的諸領(lǐng)域，為了解病理狀態(tài)下基因組的變化積累了新資料。福爾馬林固定石蠟包埋組織(formalinfixedandparaffinembeddedtissues，F(xiàn)FPE)是醫(yī)療機構(gòu)最常用的保存病理組織的方法。醫(yī)院病理科檔案中積存的大量石蠟包埋組織，是一個可靠的分子生物學(xué)研究的材料來源。由于新鮮標(biāo)本難以得到，為進行實體分子生物學(xué)研究，對已有病例進行回顧性研究時，只能從石蠟包埋組織中進行基因提取。此外，對于臨床和科研而言，石蠟包埋組織保存時間長，保存環(huán)境要求不高，十分方便操作，因此石蠟包埋組織就成為來源最豐富的珍貴資源。從石蠟包埋組織的樣品中分離出高純度高質(zhì)量的核酸是下游試驗順利進行的最基本前提。由于RNA的單鏈結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，以及自然界中存在大量RNA酶，使RNA的提取難度大于DNA，大部分產(chǎn)品仍只用于DNA的提取，用于RNA提取的相對很少，從石蠟包埋組織中提取RNA的產(chǎn)品仍然很少。
發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明實施例提供了一種從石蠟包埋組織中提取RNA的方法，包括以下步驟：
將所述石蠟包埋組織切割得到厚度為3～10μm的石蠟切片樣本，并將所述石蠟切片樣本放入微量離心管中；
在置有所述石蠟切片樣本的所述微量離心管中加入二甲苯；
在加入所述二甲苯后對所述石蠟切片樣本55℃水浴加熱3分鐘以溶解所述石蠟切片樣本中的石蠟；
對溶解于所述二甲苯的所述石蠟切片樣本進行離心，分層形成組織沉淀后去除上清液，從而去除石蠟；
向所述組織沉淀中加入無水乙醇后進行渦旋至所述組織沉淀處于不透明狀態(tài)，對處于不透明狀態(tài)的所述組織沉淀進行離心，分層后去除上清液，所述無水乙醇用于洗滌石蠟切片樣本；
在室溫下風(fēng)干，揮發(fā)所述無水乙醇得到樣品。
進一步地，步驟“將所述石蠟包埋組織切割得到厚度為3～10μm的石蠟切片樣本”，所述石蠟切片樣本的厚度為5～6μm。
進一步地，步驟“在置有所述石蠟切片樣本的所述微量離心管中加入二甲苯”，加入1mL二甲苯；步驟“在加入所述二甲苯后對所述石蠟切片樣本進行加熱直至所述石蠟切片樣本中的石蠟溶解”，在55℃水浴條件下，使所述石蠟切片樣本中的石蠟溶于所述二甲苯，加熱3分鐘溶解所述石蠟；步驟“對溶解于所述二甲苯的所述石蠟切片樣本進行離心，分層形成組織沉淀后去除上清液”，離心速度為14000～16000rpm，離心時間為2分鐘。
進一步地，步驟“向所述組織沉淀中加入無水乙醇后進行渦旋至所述組織沉淀處于不透明狀態(tài)，對處于不透明狀態(tài)的所述組織沉淀進行離心，在分層后去除上清液”，加入1mL的無水乙醇，離心速度為14000～16000rpm，離心時間為2分鐘。
進一步地，對經(jīng)上述步驟獲得的所述樣品進行RNA提取。
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