[發明專利]一種針對組織的自然染色質免疫沉淀處理方法

在審

• 申請號: 201910575929.X
• 申請日: 2019-06-28
• 公開（公告）號: CN110320357A
• 公開（公告）日: 2019-10-11
• 發明（設計）人: 吳珍芳;顧婷;甘炎民;周健;邢萍萍;譚寶華;蔡更元;李紫聰;洪林君;楊杰;鄭恩琴
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 廣東廣信君達律師事務所 44329
• 代理人: 楊曉松

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種針對組織的自然染色質免疫沉淀處理方法。本發明采用Douncing Buffer和特殊研磨手段等方式裂解豬骨骼肌組織，初步獲得組織懸液，在微鏈球菌核酸酶的消化下，獲得了高產量的且質量高的染色質，然后采用磁珠吸附的方式去除背景DNA，得到預清除背景DNA的上清液；最后將預清除背景DNA的上清液進行免疫沉淀、樣品清洗、洗脫、DNA純化和檢測，該方法獲得的染色質的產量和質量很高，適用于肝臟、腦、肺和胎盤等組織以及哺乳動物早期胚胎細胞核的收集，利用該方法可以使完整細胞核的產量最大化。同時，該方法保持了染色質制備過程中抗體識別表位的完整性。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種針對組織的自然染色質免疫沉淀處理方法。

背景技術

在細胞和組織中，構成核小體的組蛋白表現出多種翻譯后修飾，例如賴氨酸乙酰化、賴氨酸和精氨酸甲基化、絲氨酸磷酸化和賴氨酸泛素化等(Jenuwein,T.,and Allis,C.D.(2001).Translating the histone code.SCIENCE.)。這些核心組蛋白上的共價修飾在真核生物的染色質組織和基因表達中起著重要作用。研究證實組蛋白修飾能夠激活或抑制轉錄，以及調節DNA修復和復制(Turner,B.M.(2002).Cellular Memory and theHistone Code.CELL 111,285-291.)。而要揭示生物體內特定位點組蛋白修飾作用，染色質免疫共沉淀技術是首選方法。

染色質免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation，ChIP)是一種研究活體狀態下組蛋白與DNA互作的實驗技術(Rodríguez-Ubreva,J.,and Ballestar,E.(2004).Chromatin immunoprecipitation.Methods in Molecular Biology 285,41.)。其基本原理是在活細胞狀態下固定蛋白質與互作DNA的復合物，使用生物或者物理方法將其核小體間的Linker DNA隨機切斷為一定長度范圍內的染色質小片段，通過使用特異性抗體結合特異蛋白來獲取能與目的蛋白相結合的DNA片段，通過對目的片段的純化與檢測，從而獲得蛋白質與DNA相互作用的信息(Collas,P.(2010).The Current State of ChromatinImmunoprecipitation.MOL BIOTECHNOL 45,87-100.)。ChIP不僅用于檢測體內DNA與轉錄因子的動態作用，還被應用于研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關系。通過研究轉錄因子和靶基因啟動子區域的直接互作關系，可以確定其在體內相互作用的動態變化，從而得到轉錄因子結合位點信息，以確定其靶基因(Orlando,V.(2000).Mappingchromosomal proteins in vivo by formaldehyde-crosslinked-chromatinimmunoprecipitation.TRENDS BIOCHEM SCI 25,99-104.)。近年來，隨著ChIP技術的不斷完善，其已被廣泛應用于研究體內轉錄調控因子和靶基因啟動子上特異核酸序列結合(Nelson,J.D.,Denisenko,O.,and Bomsztyk,K.(2006).Protocol for the fastchromatin immunoprecipitation(ChIP)method.NAT PROTOC 1,179-185.)。