[發明專利]檢測NAT1基因分型的引物和方法

在審

• 申請號: 201910572193.0
• 申請日: 2019-06-28
• 公開（公告）號: CN110438218A
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發明（設計）人: 牛林梅;裘振亞;王淑一
• 申請（專利權）人: 杭州艾迪康醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 黃素萍;徐關壽

本發明公開了一種檢測與5?氨基水楊酸(5?aminosalicylic acid,5?ASA)等藥物代謝有關的NAT1(N?acetyltransferase 1,NAT1)基因突變分型的引物和方法，其包括擴增檢測核苷酸序列的3對引物；采用PCR擴增技術和Sanger測序技術。本發明可快速地將NAT1基因突變分型檢測出來，并可判斷其代謝表型。利用本發明完成的檢測結果準確，在抗結核治療時，可結合患者NAT1基因型的不同或代謝表型實施個體化治療方案。

技術領域

本發明屬生命科學和生物技術領域，特別涉及檢測與5-ASA等藥物代謝有 關的NAT1基因分型的引物和方法。

背景技術

N-乙酰化是藥物在體內進行生物轉化的重要代謝途徑之一，不同個體間存在 快、慢型乙酰化代謝的差異。根據編碼基因的不同可將N-乙酰基轉移酶分為 NAT1和NAT2兩型，兩者均發現具有遺傳多態性(genetic polymorphism)，可引 起相應代謝酶含量或酶活性的改變，從而影響個體的藥物代謝能力。

5-ASA是治療炎癥性腸病的主要藥物，該藥在進入結腸粘膜內后，經結腸粘 膜上皮細胞和炎細胞中的Ⅱ相代謝酶NAT1代謝，形成無抗炎作用的N-乙酰化 5-ASA，結腸粘膜局部的5-ASA濃度直接決定臨床療效，而NAT1介導的乙酰 化代謝速率的快慢可能是決定5-ASA療效的關鍵環節之一。因此，根據NAT1 的代謝速度的不同將NAT1分為不同的表型.建立檢測NAT1表型的方法有助于 判斷藥物療效并減少藥物不良反應。

目前研究表明，NAT1基因至少有26種點突變，這些NAT1基因點突變的 發生率或分布頻率存在種族差異。我國人群中主要的基因型包括NAT1*3， NAT1*4，NAT1*10和NAT1*11四種。目前多數觀點認為NAT1*4為野生型，代 表正常代謝活性，NAT1*10和NAT1*11表現為快乙酰化代謝活性，而其他突變 型則為慢代謝活性。

結合患者NAT1基因型的不同或代謝表型實施個體化治療方案，可提高治療 效果，減少藥物不良反應并提高患者依從性。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測NAT1基因突變分型的引物，采用PCR技術， 可用于快速檢測炎癥性腸病患者NAT1基因分型并判斷患者的代謝表型。所述檢 測NAT1基因突變分型的PCR擴增引物和測序引物均為：

NAT1-1-F：GTACCACGGATACTATACACTCT

NAT1-1-R：AAGATGATTGACCTGGAGAC

NAT1-2-F：CCTTTGAGAACCTTAACATCC

NAT1-2-R：CCCACCAAACAGTGAACC

NAT1-3-F：AGACATCTCCATCATCTGTGT

NAT1-3-R：ATTTACTCATCTACCAATAAAACT

檢測NAT1基因突變分型的方法，包括以下步驟：

(1)抽提外周血中的基因組DNA；

(2)以步驟1中提取的DNA為模板進行PCR擴增；

(3)對步驟2中的擴增產物進行測序；

(4)將測序結果與標準序列進行比對，確定NAT1的基因分型及代謝表型。 其中步驟2中的PCR擴增引物和步驟3中的測序引物的堿基序列均為：

NAT1-1-F：GTACCACGGATACTATACACTCT

NAT1-1-R：AAGATGATTGACCTGGAGAC

NAT1-2-F：CCTTTGAGAACCTTAACATCC