[發明專利]一種利用α-1抗蛋白酶評價鈾礦粉塵內照射生物損傷的方法

有效

• 申請號: 201910572069.4
• 申請日: 2019-06-28
• 公開（公告）號: CN110221337B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 丁德馨;易嵐;胡南;龍鼎新;趙維超;殷杰;穆紅香;李廣悅
• 申請（專利權）人: 南華大學
• 主分類號: G01T1/02
• 分類號: G01T1/02;G01N33/68;G01N33/50
• 代理公司: 湖南省國防科技工業局專利中心 43102
• 代理人: 馮青

1.一種利用α-1抗蛋白酶A1AT評價鈾礦粉塵內照射生物損傷的方法，根據WISTAR大鼠接受氣管滴注的鈾礦粉塵混懸液的量與肺組織中α-1抗蛋白酶A1AT相對表達量的上調率的劑量-效應關系，通過WISTAR大鼠肺部組織中α-1抗蛋白酶A1AT的相對表達量的上調率，評估鈾礦粉塵內照射造成的生物損傷，其特征在于，具體步驟是：

（1）建立鈾礦混懸液氣管滴注WISTAR大鼠模型；

（2）采集肺組織；

（3）α-1抗蛋白酶A1AT相對表達量上調率的檢測；

（4）內照射生物損傷綜合評價；

所述的建立鈾礦混懸液氣管滴注WISTAR大鼠模型的具體方法是：

選擇體重在180 - 220 g之間的WISTAR成年雄性大鼠，分4組，每組6只老鼠，對照組氣管滴注生理鹽水和二氧化硅的懸液，實驗組分別氣管滴注濃度為1.25、2.5和5.0 mg/ml的鈾礦粉塵懸液，每次滴注0.2 ml，一周滴注3次，連續5周；

所述的采集肺組織的具體方法是：

解剖處死的大鼠，并取肺組織，把各組織分成3等份，用生理鹽水沖洗掉血水，除去水分，裝到凍存管內，馬上放入-80℃冰箱保存；

所述的α-1抗蛋白酶A1AT相對表達量上調率的檢測具體方法是：

將收集的接受過鈾礦粉塵內照射WISTAR大鼠肺部組織進行蛋白提取、總蛋白濃度測定、蛋白質變性、凝膠電泳、轉膜、免疫反應、化學發光反應、凝膠成像掃描分析、最后進行α-1抗蛋白酶A1AT的相對表達量上調率分析；

所述內照射生物損傷綜合評價的具體方法是：

當WISTAR大鼠肺部組織中的α-1抗蛋白酶A1AT的相對表達量上調率在30%以內時，表明低劑量伽馬射線輻照對生物無損傷效應；當WISTAR大鼠肺部組織中的α-1抗蛋白酶A1AT的相對表達量上調率大于30%而小于100%時，此時的鈾礦粉塵內照射造成的生物損傷等級為Ⅰ級；當WISTAR大鼠肺部組織中的α-1抗蛋白酶A1AT的相對表達量上調率大于100%而小于200%時，此時的鈾礦粉塵內照射造成的生物損傷等級為Ⅱ級；當WISTAR大鼠肺部組織中的α-1抗蛋白酶A1AT的相對表達量上調率大于200%時，此時的鈾礦粉塵內照射造成的生物損傷等級為Ⅲ級。

2.根據權利要求1所述的一種利用α-1抗蛋白酶A1AT評價鈾礦粉塵內照射生物損傷的方法，其特征在于，

所述蛋白提取具體步驟如下：

在研缽中倒入液氮預冷，迅速取出肺部組織樣品，把組織切至均勻置于研缽中，馬上加入液氮，進行研磨，在研缽中慢慢加入800 μl LB裂解液，裂解30 min，振蕩1-2次，充分裂解，裂解結束后，收集1.5 mL的懸液到EP管中，然后在4℃下，轉速12000 r/min，離心20 min后，收集上清液，用樹脂沉淀上清液中的蛋白，4℃，12000 r/min離心20 min，去掉上清，晾干，-80℃保存備用，在干燥后的蛋白質團塊中加入200-250 μL L3裂解液，用槍頭反復吹打直至蛋白質充分分散，超聲助溶，4℃，12000 r/min，離心20 min，吸出上清液，轉移至新的EP管中。

3.根據權利要求1所述的一種利用α-1抗蛋白酶A1AT評價鈾礦粉塵內照射生物損傷的方法，其特征在于，

所述總蛋白濃度測定的具體步驟如下：

將0.2 mg/ml 的BSA 標準品溶液加稀釋液，依次稀釋成0、5、10、20、50、100、150和200μg/ml 的標準品溶液，然后測定它們在562 nm下的吸光度值，繪制標準曲線，測定每個樣品溶液在562 nm下的吸光度值后，再通過標準曲線計算出樣品中蛋白質的濃度。

4.根據權利要求1所述的一種利用α-1抗蛋白酶A1AT評價鈾礦粉塵內照射生物損傷的方法，其特征在于，

所述蛋白質變性的具體步驟如下：

將蛋白質溶液按照4:1的比例加入5×蛋白質上樣緩沖液，沸水浴變性15 min，放入-20℃冰箱保存備用。