[發明專利]一種基于金銀納米組裝體的藻毒素比率拉曼傳感器的構建方法

在審

• 申請號: 201910571416.1
• 申請日: 2019-06-28
• 公開（公告）號: CN110308137A
• 公開（公告）日: 2019-10-08
• 發明（設計）人: 趙媛;鄭芳杰;施麗霞
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;B82Y30/00;B82Y15/00
• 代理公司: 無錫華源專利商標事務所(普通合伙) 32228
• 代理人: 聶啟新

1.一種基于金銀納米組裝體的藻毒素比率拉曼傳感器的構建方法，其特征在于，所述構建方法包括如下步驟：

(1)Au@gap@AgAu核殼納米粒子的合成：

①采用檸檬酸鈉還原法合成粒徑大小為15nm的金納米粒子，在已合成的金納米粒子表面修飾拉曼信標分子對氨基苯硫酚，然后進行一層銀殼的生長形成Au@Ag核殼納米粒子；

②通過在Au@Ag核殼納米粒子表面還原氯金酸，使表面銀殼被刻蝕從而在納米粒子內部形成間隙，制備Au@gap@AgAu核殼納米粒子；

(2)Au@gap@AgAu核殼納米粒子-氧化石墨烯/四氧化三鐵納米組裝體的制備：

在Au@gap@AgAu核殼納米粒子表面修飾藻毒素適配體，通過適配體與氧化石墨烯/四氧化三鐵納米復合物上氧化石墨烯之間的π-π堆積相互作用，將Au@gap@AgAu核殼納米粒子連接到氧化石墨烯/四氧化三鐵納米復合物上，該結構表現出對氨基苯硫酚的較強拉曼增強信號以及石墨烯自身的拉曼信號；

(3)比率拉曼傳感器的構建：

在已構建好的拉曼傳感體系中，加入不同濃度的藻毒素溶液，部分Au@gap@AgAu核殼納米粒子表面的核酸適配體與藻毒素分子特異性識別，使得部分Au@gap@AgAu核殼納米粒子從氧化石墨烯/四氧化三鐵納米復合物上脫落，通過磁鐵使得組裝體與被解離下來的Au@gap@AgAu核殼納米粒子分離，通過拉曼光譜儀測定解離后的納米組裝體的拉曼信號，以對氨基苯硫酚的拉曼信號為檢測信號，石墨烯的拉曼信號為內部標準信號，建立組裝體比率拉曼信號強度和藻毒素濃度間的標準曲線。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，步驟(1)中所述Au納米粒子的表面修飾的具體制備步驟如下：采用檸檬酸鈉還原法合成粒徑大小為15nm的金納米粒子，取1mL的金納米粒子以7000轉每分鐘的速度離心10min，去除上清液，將沉淀重懸在200μL超純水中；取100μL的金納米粒子，加入2μL 100μM對氨基苯硫酚，使其終濃度為2μM，在室溫反應12h，以7000轉每分鐘的速度離心10min，去除未修飾的對氨基苯硫酚，將沉淀重懸在100μL超純水中。

3.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，步驟(1)中所述Au@Ag核殼納米粒子的具體制備步驟如下：將1mL0.1M磷酸鹽緩沖液和200μL 1％聚乙烯吡咯烷酮以及100μL抗壞血酸混合均勻，加入50μL制備好的對氨基苯硫酚編碼金納米粒子，震蕩均勻，加入500μL1mM硝酸銀溶液，搖晃3h，以7000轉每分鐘的速度離心10min，去除上清液，將沉淀重懸在400μL超純水中。

4.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，步驟(1)中所述的Au@gap@AgAu核殼納米粒子的具體制備步驟如下：將2mL 1mM聚乙烯吡咯烷酮和0.5mL 10mM抗壞血酸以及300μL100mM鹽酸溶液混合均勻，加入200μL制備好的Au@Ag核殼納米粒子，使用注射泵以200μL/min的速度將400μL 0.1mM氯金酸溶液加入到混合物中，反應10min后，將混合物以7000轉每分鐘的速度離心10min，將沉淀物溶解在200μL超純水中，該反應在室溫下進行，且通過簡單控制鹽酸溶液的添加量調節體系pH可以得到具有不同間隙大小的Au@gap@AgAu核殼納米結構。

5.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，步驟(2)中所述Au@gap@AgAu核殼納米粒子-氧化石墨烯/四氧化三鐵納米組裝體的制備具體步驟如下：取50μLAu@gap@AgAu核殼納米粒子溶液和50μL 1μM藻毒素適配體，混于200μL Tris-硼酸緩沖液中；12h后，溶液以7000轉每分鐘轉速下離心10min，將沉淀物溶解在50μL超純水中；基于藻毒素適配體與氧化石墨烯/四氧化三鐵納米復合物上氧化石墨烯之間的π-π堆積相互作用，制備Au@gap@AgAu核殼納米粒子-氧化石墨烯/四氧化三鐵納米組裝體。

6.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，步驟(3)中所述藻毒素比率拉曼傳感器的構建，具體步驟如下：將制備好的Au@gap@AgAu核殼納米粒子-氧化石墨烯/四氧化三鐵納米組裝體作為拉曼基底用于藻毒素的檢測；取50μL上述制備的組裝體加入到100μL 20mMTris-硼酸緩沖液中，加入100μL不同濃度的藻毒素溶液(0、0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、20和50nM)混合，在室溫下孵育30min，部分Au@gap@AgAu核殼納米粒子表面的適配體與藻毒素分子特異性識別，使得部分Au@gap@AgAu核殼納米粒子從氧化石墨烯/四氧化三鐵納米復合物上脫落，通過磁鐵使得組裝體與被解離下來的Au@gap@AgAu核殼納米粒子分離，將組裝體的沉淀物用70％乙醇溶液洗滌三次；通過拉曼光譜儀測定解離后的納米組裝體的拉曼信號，以對氨基苯硫酚的拉曼信號為檢測信號，石墨烯的拉曼信號為內部標準信號，建立組裝體比率拉曼信號強度和藻毒素濃度間的標準曲線。