[發明專利]利用外源金屬硫蛋白構建酵母發酵產高含硒蛋白的方法

在審

• 申請號: 201910568114.9
• 申請日: 2019-06-27
• 公開（公告）號: CN111534534A
• 公開（公告）日: 2020-08-14
• 發明（設計）人: 馬云峰;王松廷;李華
• 申請（專利權）人: 河南大學
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;C12N15/12;C12P21/00;C12R1/865
• 代理公司: 連云港聯創專利代理事務所(特殊普通合伙) 32330
• 代理人: 劉剛

1.利用外源金屬硫蛋白構建酵母發酵產高含硒蛋白的方法，其特征在于，以酵母菌作為原始菌株，設計引物對YES2-MT2和引物對MT2-yes2-F，經遺傳轉化得到基因工程菌，基因工程菌再經過發酵生產高含硒蛋白；

設計引物對YES2-MT2和引物對MT2-yes2-F，其序列如下：

YES2-MT2-R：AGCAGTTGGGGTCCATGGATCCGAGCTCGGTACCAAGCTTA

YES2-MT2-F：GCTGTGCCGACGACGACAAGatGGGTAAGGGAGAAGAACTT

MT2-yes2-F:GGTACCGAGCTCGGATCCATGGACCCCAACTGCTCCTGTG

MT2-Yes2-R:TTACCCATCTTGTCGTCGTCGGCACAGCAGCTGCACTTGT

其中引物對YES2-MT2用于反向擴增載體序列帶MT2同源臂，引物對MT2-yes2-F用于擴增MT2片段。

2.如權利要求1所述的利用外源金屬硫蛋白構建酵母發酵產高含硒蛋白的方法，其特征在于，所述的酵母菌為釀酒酵母。

3.如權利要求1所述的利用外源金屬硫蛋白構建酵母發酵產高含硒蛋白的方法，其特征在于，將基因工程菌先進行活性培養，再按1～10％的接種量接種到種子培養基中，于28～30℃好氧培養4～8h；然后將培養好的種子按2～5％的接種量接入液體發酵培養基。其中，所述種子培養基為馬鈴薯液體培養基，培養基pH自然。

4.如權利要求3所述的利用外源金屬硫蛋白構建酵母發酵產高含硒蛋白的方法，其特征在于，種子培養于28～30℃好氧培養4～8h，培養基中加亞硒酸鈉,濃度為0.1-10mmol/L；在搖瓶中進行，搖床轉速160～230r/min；發酵培養于28～30℃好氧培養4～8h，發酵罐通風量0.5～1vvm，攪拌轉速為100～600r/min。

5.如權利要求1所述的利用外源金屬硫蛋白構建酵母發酵產高含硒蛋白的方法，其特征在于，在發酵結束后，將發酵液離心后保留沉淀，加緩沖液，細胞破壁；離心取上清溶液，用腸激酶水解后，離心取上清溶液。