[發明專利]一種利用本土化土壤試驗動物評估重金屬污染土壤生態毒性的方法

在審

• 申請號: 201910567276.0
• 申請日: 2019-06-27
• 公開（公告）號: CN110244022A
• 公開（公告）日: 2019-09-17
• 發明（設計）人: 朱江;李炳智;楊道麗;楊潔;張施陽;吉敏;余強
• 申請（專利權）人: 上海市環境科學研究院
• 主分類號: G01N33/24
• 分類號: G01N33/24
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

1.一種利用本土化土壤試驗動物評估重金屬污染土壤生態毒性的方法，其特征在于，選用一種白線蚓即球腎白線蚓作為試驗動物，對重金屬污染土壤進行重金屬的生態毒性效應試驗；試驗用白線蚓先預養一段時間，然后選擇具有環帶的健壯成體進行試驗；正式試驗前，先進行預試驗；預試驗方法是：在不同重金屬濃度的土壤中放入一定數量比例的球腎白線蚓，控制土壤含水量在30-45％；然后置于溫度15-25℃、濕度70-80％、光照的人工氣候箱中進行預試驗，確定最低致死濃度；參考預試驗結果確定的最低致死濃度，設置正式試驗的各濃度處理組的重金屬暴露濃度，同時設置去離子水試驗組作為對照；設置試驗期間人工土壤的平均含水率在30％～45％之間；每組試驗各設多個重復試驗；各濃度處理組的每個重復試驗中放入與預試驗相同數量比例的球腎白線蚓，記錄各濃度處理組的球腎白線蚓在暴露一定時間后的生存狀況，并計算半數致死劑量LD₅₀值。

2.根據權利要求1所述的利用本土化土壤試驗動物評估重金屬污染土壤生態毒性的方法，其特征在于，具體按如下步驟進行：

(1)試驗動物的選取

選用一種白線蚓即球腎白線蚓蚓作為試驗動物，對重金屬污染土壤進行重金屬的生態毒性效應試驗；試驗用白線蚓先預養一段時間，然后選擇平均重量為1.0-1.5mg具有環帶的健壯成體進行試驗；

(2)預試驗

正式試驗前，進行預試驗：將一定量不同濃度的重金屬去離子水溶液與一定量的人工土壤置于容器中混合均勻，使土壤中重金屬濃度在0.1-1000mg/kg土壤干重，使土壤含水量達到30％～45％；人工土壤中，泥炭蘚5-15％、高嶺黏土15-25％、石英砂60-80％；各濃度處理組的每個試驗中放入一定數量比例的球腎白線蚓；用薄膜封住容器口，扎孔透氣；然后置于人工氣候箱中進行預試驗，溫度設定為18-22℃，濕度為72-78％，24h光照；記錄各濃度處理組的球腎白線蚓的生存狀況，確定最低致死濃度；

(3)正式試驗濃度設置

參考預試驗結果確定的最低致死濃度，設置正式試驗的重金屬暴露濃度，同時設置去離子水試驗組作為對照；

(4)試驗動物放入量設置

每組試驗各設2-4個重復試驗；各濃度處理組的每個重復試驗中放入與預試驗相同數量比例的球腎白線蚓；

(5)人工土壤含水率設置

設置試驗期間人工土壤的平均含水率在30％～45％之間；

(6)暴露時間設置

設置暴露時間為3-4d；

(7)按上述試驗條件進行正式試驗；

將不同濃度的重金屬去離子水溶液與一定量的人工土壤置于容器中混合均勻，使土壤中重金屬濃度達到步驟(3)設置的重金屬暴露濃度，使土壤含水量達到30％～45％；人工土壤中含泥炭蘚10-20％、高嶺黏土10-20％、石英砂60-80％；每組試驗各設2-4個重復試驗；各濃度處理組的每個重復試驗中放入與預試驗相同數量比例的球腎白線蚓；用薄膜封住容器口，扎孔透氣；然后置于人工氣候箱中進行試驗，溫度設定為18-22℃，濕度為72-78％，24h光照；記錄各濃度處理組的球腎白線蚓在暴露3-4d后的生存狀況，并計算LD₅₀值。

3.根據權利要求2所述的利用本土化土壤試驗動物評估污染土壤生態毒性的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，試驗用白線蚓先預養一段時間，然后選擇平均重量為1.2±0.2mg具有環帶的健壯成體進行試驗。

4.根據權利要求2所述的利用本土化土壤試驗動物評估污染土壤生態毒性的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，正式試驗前，進行預試驗：將不同濃度的重金屬去離子水溶液與人工土壤置于容器中混合均勻，使土壤中重金屬濃度為0.1、1.0、10、100、1000mg/kg土壤干重，使土壤含水量達到40％；人工土壤中含泥炭蘚10％、高嶺黏土20％、石英砂70％；各濃度處理組的每個試驗中每500g土壤放入100條球腎白線蚓；用薄膜封住容器口，扎孔透氣；然后置于人工氣候箱中進行預試驗，溫度設定為20±1℃，濕度為75％，24h光照；記錄各濃度處理組的球腎白線蚓的生存狀況，確定最低致死濃度。