[發(fā)明專利]一種棉花育性恢復(fù)相關(guān)的分子標(biāo)記及其應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201910566536.2 | 申請(qǐng)日： | 2019-06-27 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN110331222B | 公開（公告）日： | 2021-08-31 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 邢朝柱;張夢(mèng);吳建勇;馮娟娟;郭立平;戚廷香;張學(xué)賢;王海林;唐會(huì)妮;喬秀琴 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/6895 | 分類號(hào)： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11;A01H1/02;A01H1/04 |
| 代理公司： | 北京漢智嘉成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11682 | 代理人： | 蔣宇星;高芬芳 |
| 地址： | 455000 河*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 棉花 恢復(fù) 相關(guān) 分子 標(biāo)記 及其 應(yīng)用 | ||
1.鑒定或輔助鑒定待測(cè)棉花恢復(fù)基因的引物對(duì)，其由引物1和引物2組成；所述引物1為序列表中序列2所示的單鏈DNA分子；所述引物2為序列表中序列3所示的單鏈DNA分子；所述棉花恢復(fù)基因的InDel分子標(biāo)記為序列表中序列1所示的DNA分子；所述引物對(duì)用于檢測(cè)所述棉花恢復(fù)基因的InDel分子標(biāo)記。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物對(duì)，其特征在于：所述引物1和引物2的摩爾比為1:1。
3.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的引物對(duì)在如下(1)-(6)任一中的應(yīng)用：
(1)鑒定或輔助鑒定棉花材料是否含有恢復(fù)基因及位點(diǎn)是否純合；
(2)制備鑒定或輔助鑒定棉花材料是否含有恢復(fù)基因及位點(diǎn)是否純合的產(chǎn)品；
(3)鑒定或輔助鑒定棉花恢復(fù)系；
(4)制備鑒定或輔助鑒定棉花恢復(fù)系的產(chǎn)品；
(5)鑒定或輔助鑒定棉花恢復(fù)系的種子純度；
(6)制備鑒定或輔助鑒定棉花恢復(fù)系的種子純度的產(chǎn)品。
4.一種鑒定或輔助鑒定棉花恢復(fù)基因的方法，包括如下步驟：
采用權(quán)利要求1或2所述的引物對(duì)對(duì)待測(cè)棉花樣品的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分析；根據(jù)擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行判斷，標(biāo)準(zhǔn)如下：
如果只擴(kuò)增出113bp的單一條帶，則待測(cè)棉花材料不含恢復(fù)基因位點(diǎn)；
如果只擴(kuò)增出182bp的單一條帶，則待測(cè)棉花材料的恢復(fù)基因位點(diǎn)純合；
如果同時(shí)擴(kuò)增出113bp和182bp這兩個(gè)條帶，則待測(cè)棉花材料的恢復(fù)基因位點(diǎn)雜合；
所述恢復(fù)基因的InDel分子標(biāo)記為序列表中序列1所示的DNA分子。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：所述電泳分析為瓊脂糖凝膠電泳分析。
6.權(quán)利要求4所述的方法在如下(1)-(6)任一中的應(yīng)用：
(1)鑒定或輔助鑒定棉花材料是否含有恢復(fù)基因及位點(diǎn)是否純合；
(2)制備鑒定或輔助鑒定棉花材料是否含有恢復(fù)基因及位點(diǎn)是否純合的產(chǎn)品；
(3)鑒定或輔助鑒定棉花恢復(fù)系；
(4)制備鑒定或輔助鑒定棉花恢復(fù)系的產(chǎn)品；
(5)鑒定或輔助鑒定棉花恢復(fù)系的種子純度；
(6)制備鑒定或輔助鑒定棉花恢復(fù)系的種子純度的產(chǎn)品。
7.棉花恢復(fù)系回交改良的方法，包括如下步驟：
采用權(quán)利要求1或2所述的引物對(duì)，對(duì)用于恢復(fù)系回交改良的轉(zhuǎn)育群體從回交一代開始進(jìn)行分子標(biāo)記跟蹤，每一代從回交群體中選擇綜合農(nóng)藝性狀優(yōu)良且恢復(fù)基因位點(diǎn)雜合的單株，繼續(xù)與輪回親本材料進(jìn)行回交；這樣回交4-6代后，再選擇目標(biāo)優(yōu)良單株自交，自交后代繼續(xù)采用權(quán)利要求1或2所述的引物對(duì)進(jìn)行分子檢測(cè)，篩選出綜合農(nóng)藝性狀優(yōu)良且恢復(fù)基因位點(diǎn)純合的新恢復(fù)系材料。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的棉花恢復(fù)系回交改良的方法，其特征在于：所述恢復(fù)基因位點(diǎn)雜合的單株為含有182bp和113bp兩個(gè)目標(biāo)條帶的單株；所述恢復(fù)基因位點(diǎn)純合的新恢復(fù)系材料為只擴(kuò)增出182bp的單一條帶的新恢復(fù)系材料。
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