[發明專利]一種通過檢測肌酐和1-甲基海因含量推斷水中尸體浸沒時間的方法

有效

• 申請號: 201910564509.1
• 申請日: 2019-06-27
• 公開（公告）號: CN110161151B
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發明（設計）人: 袁慧雅
• 申請（專利權）人: 中國醫科大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 沈陽亞泰專利商標代理有限公司 21107
• 代理人: 史力伏

1.一種通過檢測肌酐和1-甲基海因(1-Methylhydantoin, 1-MH)含量推斷水中尸體浸沒時間的方法，包括如下步驟：

（1）實驗動物心血和骨骼肌中肌酐和1-MH含量檢測方法開發；

（2）建立不同溫度和水體環境下水中尸體動物模型；

（3）用（1）中建立的方法檢測（2）中建立的模型的水中尸體心血和骨骼肌中肌酐和1-MH的含量；

（4）根據（3）中水中尸體心血和骨骼肌中肌酐和1-MH的含量，繪制出肌酐降解曲線C_肌酐-PMSI曲線和1-MH生成曲線C_1-MH-PMSI；

（5）通過（4）中得到的C_1-MH-PMSI曲線推斷水中尸體浸沒時間；

所述（1）中實驗動物心血和骨骼肌中肌酐和1-MH含量檢測方法的建立，包括以下步驟：購置肌酐、1-MH對照品，建立高效液相色譜-質譜聯用HPLC-MS/MS檢測方法，采用的檢測方法條件如下：Agilent 1260-6420三重串聯四級桿液質聯用儀；色譜柱：Agilent Zorbax SBC18，2.1mm×50mm，1.8μm；流動相：0.1%甲酸溶液：乙腈的體積比為30：70；流速0.20mL/min；進樣體積1μL；ESI離子源正離子模式；干燥氣溫度350℃；干燥氣流速10L/min；霧化器壓力50psi；毛細管出口電壓180V；碰撞電壓30V；多反應監測MRM模式；肌酐檢測的離子對為m/z114.0→86.2，m/z 114.0→44.2；1-MH檢測的離子對為m/z 115.1→87.0，m/z 115.1→44.0；樣品處理過程：取大鼠心血100μL或將0.1g大鼠骨骼肌勻漿后加入500μL乙腈，混合3min，用高速離心機13000 r/min離心10 min，取上清液200μL進樣分析；

所述（2）中不同溫度和水體環境下水中尸體動物模型建立，包括以下步驟：將實驗用大鼠分為自然淡水環境死后拋尸入水組和自然淡水控溫死后拋尸入水組；自然淡水環境死后拋尸入水組是在平均氣溫為25℃的夏季條件下，取雄性SD大鼠90只，隨機分為15組，每組6只；用頸椎脫位的方法處死大鼠，在自然淡水環境中將大鼠分別放置24、48、60、72、84、96、108、120、132、144、156、168、180、192、204 h后撈出進行解剖取材，并用全自動溫濕度記錄儀連續采集實驗過程中的水體溫度和附近的氣溫；浸泡過程中逐一打撈解剖取大鼠心血、肝、脾、肺、腎、雙腿腓腸肌、骨骼肌、玻璃體液，并于-80℃保存檢材；自然淡水控溫死后拋尸入水組是將河水放置于大型塑料容器中，并用空調控制水溫在25℃，將大鼠頸椎脫位處死后在恒溫條件下浸泡；實驗動物數目、分組情況和取材時間點同自然淡水環境組；浸泡過程中逐一打撈解剖取大鼠心血、肝、脾、肺、腎、雙腿腓腸肌、骨骼肌、玻璃體液，并于-80℃保存檢材。