[發(fā)明專利]多頭帶絳蟲Antigen B的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910561192.6
• 申請日: 2019-06-26
• 公開（公告）號: CN110208553B
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊光友;劉俞辰;古小彬;謝躍
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N33/92
• 分類號: G01N33/92;G01N33/53;G01N33/535;C12N15/70
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 劉猛

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，公開了多頭帶絳蟲Antigen B作為腦多頭蚴病診斷抗原等一系列相關(guān)應(yīng)用，相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，多頭帶絳蟲Antigen B能被感染腦多頭蚴的山羊血清所識(shí)別而不與陰性血清反應(yīng)，具有良好的免疫原性和反應(yīng)原性；同時(shí)在間接ELISA方法中表現(xiàn)出較高敏感性和特異性，且相對其他蛋白具有較好的熱穩(wěn)定性，種種結(jié)果證明多頭帶絳蟲Antigen B可以作為腦多頭蚴病的診斷抗原，以及應(yīng)用到檢測試劑盒中。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及多頭帶絳蟲Antigen B的應(yīng)用。

背景技術(shù)

腦多頭蚴病(Cerebral coenurosis)是多頭帶絳蟲(Taenia multiceps)的中絳期幼蟲所引起的一種對牛羊危害嚴(yán)重的寄生蟲病。腦多頭蚴主要寄生于牛羊的中樞神經(jīng)系統(tǒng)，也可寄生于皮下或肌肉組織，在誤食多頭帶絳蟲蟲卵的情況下人類也可以充當(dāng)中間宿主。這種疾病常導(dǎo)致牛羊的直接死亡，給歐洲、美國、非洲和亞洲的畜牧業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，對感染動(dòng)物的準(zhǔn)確診斷是目前研究的重點(diǎn)方向之一。

針對腦多頭蚴病的診斷方法包括解剖學(xué)、影像學(xué)和實(shí)驗(yàn)室診斷。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)也逐步被應(yīng)用于該病的臨床診斷中。近年來，已報(bào)道基于多頭帶絳蟲重組抗原(Tm-P2、Tm-HSP70、Tm-GP50、Tm-GST和Tm-HSP60)的ELISA診斷方法，取得了良好的檢測效果，但用于生產(chǎn)的抗原所具備的熱穩(wěn)定性一直有待改善。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供多頭帶絳蟲Antigen B(Tm-AgB)作為腦多頭蚴病的診斷抗原以及在制備腦多頭蚴病的診斷抗原中的應(yīng)用，使得多頭帶絳蟲Antigen B具有較高的特異性和敏感性；

本發(fā)明的另外一個(gè)目的在于提供多頭帶絳蟲Antigen B(Tm-AgB)在制備檢測腦多頭蚴病的試劑盒中的應(yīng)用，使得以所述多頭帶絳蟲Antigen B建立的ELISA方法顯示出其較高的特異性和敏感性，可用于ELISA檢測；

在本文中，多頭帶絳蟲Antigen B可以是非天然的，例如是合成的或者由人工載體表達(dá)的(業(yè)內(nèi)常稱為重組蛋白rTm-AgB)。術(shù)語“非天然的”是指目標(biāo)物質(zhì)不是自然界天然存在的，這并不排除所述非天然物質(zhì)與天然存在的物質(zhì)具有相同的結(jié)構(gòu)和/或組成。

抗原B(Antigen B)是一種絳蟲所特有的一種脂蛋白，Monteriro等發(fā)現(xiàn)AgB的3個(gè)亞基AgB8/1、AgB8/2和AgB8/3分子可自發(fā)聚合成120～120kDa的寡聚體，該寡聚體對熱穩(wěn)定，具有螺旋環(huán)狀二色光譜特性，類似天然Ag B。現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)表明了Antigen B相對多頭帶絳蟲其他蛋白具有很好的熱穩(wěn)定性，但是Antigen B在腦多頭蚴病中的相關(guān)研究尚未見報(bào)道。

本發(fā)明通過原核表達(dá)得到重組多頭帶絳蟲Antigen B(rTm-AgB，其和Tm-AgB具備完全相同的氨基酸序列，如SEQ ID NO:1所示)，對其進(jìn)行免疫印跡，ELISA以及診斷方法的建立。免疫印跡結(jié)果顯示重組抗原能夠被感染腦多頭蚴的山羊血清所識(shí)別產(chǎn)生特異條帶，而對照組陰性血清無反應(yīng)，說明重組抗原具有較強(qiáng)的免疫反應(yīng)性和良好的免疫原性。

間接ELISA結(jié)果顯示，利用rTm-AgB建立的ELISA方法敏感性高達(dá)95.8％(23/24)，特異性為87.5％(21/24)，與莫尼茨絳蟲、肝片吸蟲以及捻轉(zhuǎn)血矛線蟲中各3份血清產(chǎn)生交叉反應(yīng)，與泡狀帶絳蟲中2份血清產(chǎn)生交叉反應(yīng)，與細(xì)粒棘球絳蟲8份血清產(chǎn)生交叉反應(yīng)。與其進(jìn)行比較的rTm-TPx的敏感性較低僅為75.0％(18/24)，特異性為91.7％(22/24)；rTm-HSP70的敏感性為87.5％(21/24)，特異性為83.3％(20/24)；而rTm-GST的敏感性為83.3％(20/24)，特異性為91.7％(22/24)；綜上所述，rTm-AgB同時(shí)具有較高的敏感性和特異性，且相對其他蛋白具有較好的熱穩(wěn)定性，具有較好的診斷效果，適合作為腦多頭蚴病的診斷抗原以及作為診斷抗原制備相關(guān)的檢測試劑盒。