[發明專利]一種檢測血漿中肝細胞來源外泌體的方法有效
| 申請號： | 201910559220.0 | 申請日： | 2019-06-26 |
| 公開（公告）號： | CN112147058B | 公開（公告）日： | 2023-04-07 |
| 發明（設計）人： | 時紅波;陳德喜;焦彥;許萍;時紅林 | 申請（專利權）人： | 首都醫科大學附屬北京佑安醫院 |
| 主分類號： | G01N15/14 | 分類號： | G01N15/14;G01N1/28;G01N1/30 |
| 代理公司： | 北京汲智翼成知識產權代理事務所(普通合伙) 11381 | 代理人： | 陳曦;賈興昌 |
| 地址： | 100069 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 血漿 肝細胞 來源 外泌體 方法 | ||
1.一種檢測血漿中肝細胞來源外泌體的方法，其特征在于所述方法步驟如下：
(1)首先對血漿樣本進行外泌體提取，用吸管吸取血漿加入到離心管中，每管1ml，用PBS緩沖液補液至12ml，第一次常溫低速離心提取，離心力2000～3000g，離心10～20分鐘，取上清液；
(2)第二次低速離心提取，離心力10000～12000g，離心溫度4度，離心30～60分鐘，取上清液；
(3)第三次真空環境下高速離心，將步驟(2)上清液倒入離心管后用PBS補液至距管口1～2mm處，啟動真空，當真空值50μm時啟動離心，離心力100000～120000g，離心時間大于1小時，離心溫度4度，然后停止離心釋放真空；
(4)離心好后，棄上清液，PBS重懸；
(5)外泌體染色：加入直標抗體ALB-AF488和CD63-PE，室溫避光30分鐘后加入PBS離心，離心力100000～120000g，離心時間70min～120min；
(6)倒掉管內液體，用管壁回流液體避光震蕩重懸；
(7)利用Amnis量化成像分析流式細胞儀檢測提取的外泌體，進行肝細胞來源外泌體的區分。
2.如權利要求1所述的檢測血漿中肝細胞來源外泌體的方法，其特征在于：
所述步驟(1)中，離心力為2000g。
3.如權利要求1所述的檢測血漿中肝細胞來源外泌體的方法，其特征在于：
所述步驟(2)中，離心力為10000g。
4.如權利要求1所述的檢測血漿中肝細胞來源外泌體的方法，其特征在于：
所述步驟(3)中，離心力為110000g。
5.如權利要求1所述的檢測血漿中肝細胞來源外泌體的方法，其特征在于：
所述步驟(5)中，離心力為110000g。
6.如權利要求1所述的檢測血漿中肝細胞來源外泌體的方法，其特征在于：
所述Amnis量化成像分析流式細胞儀的檢測參數為：激發光波長為400～500nm和600～700nm，強度為50～200mW，散射光SSC強度為15～20mW。
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