[發(fā)明專利]一種促進(jìn)黃芪不定根異黃酮積累的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910547865.2
• 申請日: 2019-06-24
• 公開（公告）號: CN110100739B
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳松權(quán);金河延;全雪麗
• 申請（專利權(quán)）人: 延邊大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 西安銘澤知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61223
• 代理人: 李振瑞

本發(fā)明提供了一種促進(jìn)黃芪不定根異黃酮積累的方法，包括以下步驟：S1、將黃芪不定根接種到改良B5液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)27～33天；改良B5液體培養(yǎng)基配方為：3/4B5液體培養(yǎng)基+蔗糖25～35g/L+吲哚丁酸1.5～4.0mg/L，pH5.8～6.0；S2、向S1培養(yǎng)基中加入乙烯利的乙醇溶液，使培養(yǎng)基中乙烯利的濃度為5～50μM/L，培養(yǎng)2～7天；S3、收取黃芪不定根，干燥。本發(fā)明通過將黃芪不定根在改良B5培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并加入乙烯利作為誘導(dǎo)子，有效促進(jìn)了黃芪不定根內(nèi)生物量和異黃酮含量的提高，且培養(yǎng)過程簡單，條件溫和，適用于黃芪的大規(guī)模生產(chǎn)和黃芪異黃酮的工業(yè)化生產(chǎn)，具有較高的現(xiàn)實(shí)意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種促進(jìn)黃芪不定根異黃酮積累的方法。

背景技術(shù)

黃芪為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，具有補(bǔ)氣升陽、固表止汗、脫毒排膿、利水消腫和生肌等功效，常用于藥品、保健品、食品等行業(yè)。異黃酮是黃芪的主要活性成分，具有抗氧化、抗病毒、降血糖、保護(hù)神經(jīng)、抑制黑色素形成和改善疲勞等藥理作用，但是黃芪異黃酮產(chǎn)量低。黃芪異黃酮主要包括毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊異黃酮和芒柄花素等，其中毛蕊異黃酮葡萄糖苷是評價(jià)黃芪藥材質(zhì)量的“標(biāo)記化合物”之一。

目前，黃芪主要依賴人工栽培，然而栽培黃芪生長周期長，常受病、蟲、草害的困擾，而且異黃酮含量也不穩(wěn)定，經(jīng)常受到環(huán)境因素的影響。為了解決這個問題，滿足人們對黃芪異黃酮的需要，人們嘗試使用組織培養(yǎng)如愈傷組織、毛狀根和不定根培養(yǎng)的方法生產(chǎn)黃芪異黃酮。但是，目前尚未見到利用3/4改良B5培養(yǎng)基結(jié)合添加乙烯利來促進(jìn)黃芪不定根異黃酮積累的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決上述技術(shù)的不足，提供一種促進(jìn)黃芪不定根異黃酮積累的方法，通過在3/4改良B5液體培養(yǎng)中添加誘導(dǎo)因子乙烯利，有效促進(jìn)了黃芪不定根生物量和異黃酮含量的提高。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種促進(jìn)黃芪不定根異黃酮積累的方法，包括以下步驟：

S1、將黃芪不定根接種到改良B5液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)27～33天；

所述改良B5液體培養(yǎng)基配方為：3/4B5液體培養(yǎng)基+蔗糖25～35g/L+吲哚丁酸1.5～4.0mg/L，pH 5.0～6.0；

S2、向S1的改良B5液體培養(yǎng)基中加入乙烯利的乙醇溶液，所述改良B5液體培養(yǎng)基中乙烯利的濃度為5～50μM/L，培養(yǎng)2～7天；

S3、收取S2培養(yǎng)后的黃芪不定根，清洗干燥。

優(yōu)選的，所述S1和S2的培養(yǎng)條件為：溫度25±2℃，無光照，無菌。

優(yōu)選的，所述S2中乙烯利的乙醇溶液的濃度為100mM/mL，所述乙烯利的乙醇溶液經(jīng)過0.45μm濾膜過濾滅菌。

優(yōu)選的，所述S3中干燥溫度為55～60℃，干燥時間為2～3天。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下：

本發(fā)明通過將黃芪不定根在改良B5營養(yǎng)液中培養(yǎng)，并加入乙烯利作為誘導(dǎo)子，有效促進(jìn)了黃芪不定根內(nèi)生物量和異黃酮含量的提高，且培養(yǎng)過程簡單，條件溫和，適用于黃芪的大規(guī)模生產(chǎn)和黃芪異黃酮的工業(yè)化生產(chǎn)，滿足人們對黃芪異黃酮的需求。

具體實(shí)施方式

下面通過具體實(shí)施方式例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。本發(fā)明的范圍并不受限于該具體實(shí)施方式。

本發(fā)明使用的3/4B5液體培養(yǎng)基是指液體培養(yǎng)基的總體積不變，營養(yǎng)成分縮小為原來的3/4，3/4B5液體培養(yǎng)基的配方如表1。

表1 3/4B5液體培養(yǎng)基的配方