[發明專利]一種新型的呼吸道合胞病毒疫苗抗原的制備方法及其用途有效
| 申請號： | 201910547720.2 | 申請日： | 2019-06-21 |
| 公開（公告）號： | CN110229219B | 公開（公告）日： | 2021-03-30 |
| 發明（設計）人： | 肖庚富;張艷君;朱圣淋;張磊珂;吳妍 | 申請（專利權）人： | 中國科學院武漢病毒研究所 |
| 主分類號： | C07K14/135 | 分類號： | C07K14/135;C12N15/45;C12N15/85;C12N5/10;A61K39/155;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 覃蛟 |
| 地址： | 430000 湖北省武*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 新型 呼吸道 病毒 疫苗 抗原 制備 方法 及其 用途 | ||
1.一種疫苗抗原，其特征在于，其包括至少一種呼吸道合胞病毒的F蛋白以及至少一種呼吸道合胞病毒的SH蛋白；
所述疫苗抗原為F蛋白和SH蛋白的融合蛋白；
所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。
2.一種編碼如權利要求1所述的疫苗抗原的核酸分子。
3.根據權利要求2所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的堿基序列如SEQ IDNo.6所示。
4.一種表達載體，其特征在于，其包含有如權利要求2所述的核酸分子。
5.根據權利要求4所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體為PsecTag2A。
6.一種疫苗抗原的制備方法，其特征在于，其包括：在使宿主細胞能夠生產如權利要求1所述的疫苗抗原的條件下，將一個或多個如權利要求4或5所述的表達載體導入所述宿主細胞。
7.根據權利要求6所述的疫苗抗原的制備方法，其特征在于，所述宿主細胞選自真核細胞。
8.根據權利要求7所述的疫苗抗原的制備方法，其特征在于，所述導入包括將所述表達載體與轉染試劑混合后轉染宿主細胞，所述轉染試劑與所述表達載體的質量比為1.25：(4.1～5.5)，所述轉染試劑為PEI。
9.根據權利要求8所述的疫苗抗原的制備方法，其特征在于，將所述表達載體與所述轉染試劑混合后的混合物室溫靜置5～15min后轉染宿主細胞，轉染后4～6h，加入轉染體系40％～60％體積的新鮮培養基和18～22mM的丙戊酸VPA。
10.根據權利要求6所述的疫苗抗原的制備方法，其特征在于，所述制備方法還包括將轉染后得到的融合蛋白進行蛋白純化。
11.根據權利要求10所述的疫苗抗原的制備方法，其特征在于，所述蛋白純化包括將轉染后得到的細胞溶液進行離心，收集細胞上清，對細胞上清通過透析、親和層析純化后，得到純化后的融合蛋白。
12.根據權利要求10所述的疫苗抗原的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括將純化過后得到的融合蛋白進行濃縮。
13.根據權利要求12所述的疫苗抗原的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括將純化過后得到的融合蛋白采用超濾管進行濃縮。
14.根據權利要求12所述的疫苗抗原的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括將濃縮后的融合蛋白與佐劑混合。
15.根據權利要求14所述的疫苗抗原的制備方法，其特征在于，所述佐劑為單磷酰脂質A。
16.采用如權利要求6～15任一項所述的疫苗抗原的制備方法制備的疫苗抗原。
17.一種免疫原性組合物，其特征在于，其包括至少一種如權利要求1所述的疫苗抗原。
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