[發(fā)明專利]一種三磷酸腺苷熒光檢測水產品新鮮度的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910547473.6
• 申請日: 2019-06-24
• 公開（公告）號: CN110057805B
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發(fā)明（設計）人: 莊旭明;高雪情;劉惠濤;欒鋒;劉佳;田春媛
• 申請（專利權）人: 煙臺大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 馬國冉

本發(fā)明涉及食品質量分析領域，具體來說是一種檢測水產品新鮮度的方法。步驟包括：樣品預處理，金屬有機框架/銅納米團簇、水產品上清液以及Tris?HCl緩沖液混合孵育，通過測定其熒光發(fā)射強度，并將強度值代入線性方程，確定ATP的濃度范圍。本發(fā)明合成的復合材料低毒無污染、成本低、簡單易得，用于檢測ATP，具有靈敏度高，抗干擾能力強，方法簡便易操作以及可實現(xiàn)快速檢測等優(yōu)點，在優(yōu)化后的最佳實驗條件下，可以準確快速地實現(xiàn)水產品中ATP含量的檢測,并以此作為水產品質鮮度的評價指標。

技術領域

本發(fā)明涉及食品質量分析領域，具體涉及一種腺苷三磷酸熒光檢測水產品新鮮度的方法。

背景技術

水產品作為人類日常飲食的一部分，其新鮮度不僅影響其自身的口感還會對人類健康產生一定影響。K值是目前用來衡量水產品新鮮度最常用的指標，活體水產品的肌肉運動都需要腺苷三磷酸（ATP）來提供能量，死后的水產品體內的ATP就會在酶的作用下被降解為其他物質。K值可表示為次黃嘌呤核苷、次黃嘌呤量之和與ATP及降解產物總量的百分比。另一方面，ATP還是生物體的最直接能量來源。具有代謝活性的細胞含有一定量的ATP，而在凋亡或者壞死的細胞中ATP含量則迅速下降，因此，ATP還可作為細胞活性的標志物。

目前，對ATP的檢測方法主要有層析法，毛細管電泳法，液相色譜串聯(lián)質譜法等。這些傳統(tǒng)方法大多需要繁瑣的樣品前處理過程，儀器操作復雜，價格昂貴。

發(fā)明內容

針對上述現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供一種腺苷三磷酸熒光檢測水產品新鮮度的方法。該方法具有靈敏度高，抗干擾能力強，方法簡便易操作以及可實現(xiàn)快速檢測等優(yōu)點。

一種腺苷三磷酸熒光檢測水產品新鮮度的方法，步驟包括：

（1）將水產品肉質經破碎、調pH至7.4，Tris-HCl緩沖液定容后,以8000轉/min離心5 min，濾膜過濾后獲得上清液；

（2）將步驟（1）得到的上清液1mL加入到1–2 mL 金屬有機框架/銅納米團簇CuNCs/ZIF-90水溶液中，混勻后加入1 mL的Tris-HCl緩沖液；在25–37℃溫度下孵育5–30分鐘；在365 nm的激發(fā)波長下測定其熒光發(fā)射強度，并將強度值代入線性關系式，確定腺苷三磷酸ATP的濃度范圍；

（3）根據(jù)腺苷三磷酸ATP的濃度大小判斷水產品新鮮度：濃度越高，水產品越新鮮。

進一步的，所述的水產品為海水魚、爬蝦或青蝦。

進一步的，所述的金屬有機框架/銅納米團簇CuNCs/ZIF-90的合成方法：稱取0.5960 g Zn(NO₃)₂· 6H₂O和0.0961 g 咪唑-2-甲醛（2-ICA）于20 mL DMF溶液中，超聲10–20分鐘至完全溶解，攪拌狀態(tài)下加入5 mL合成的混有Al³⁺的銅納米團簇溶液，并攪拌12 h，將攪拌12 h后的混合溶液靜置30-60分鐘，將上清液移除，剩下的以8000–10000轉/min離心5–10分鐘，接著用5-10 mL DMF溶液洗滌3次，洗滌后再以8000–10000轉/min離心5–10分鐘，最終得到的沉淀置于真空干燥箱中并在45–60 ℃的溫度下烘干，即得金屬有機框架/銅納米團簇；

所述合成的混有Al³⁺的銅納米團簇溶液的制備方法：在合成的pH=7–7.4的CuNCs溶液中加入50–100 μL的Al³⁺水溶液（0.1 M）,攪拌5–10分鐘，混合液由澄清透明狀態(tài)變至白色渾濁狀態(tài)，即得；

合成銅納米團簇（CuNCs）的方法：將2.5–5 mL的50 mM谷胱甘肽水溶液與2.5–5 mL的10 mM CuSO₄·5H₂O水溶液充分混合，然后在攪拌狀態(tài)下用1 M NaOH溶液調節(jié)混合液pH值至7–7.4，混合液由白色懸濁狀態(tài)變至澄清透明狀態(tài)，即得。