[發(fā)明專(zhuān)利]一種miRNA在制備預(yù)防或診斷血脂異常肝郁證試劑中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910543827.X
• 申請(qǐng)日: 2019-06-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110229877A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-09-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳瀅宇
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣東藥科大學(xué)附屬第一醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6883
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6851
• 代理公司: 廣州粵高專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 林瑞云;彭東梅

本發(fā)明涉及一種miRNA在制備預(yù)防或診斷血脂異常肝郁證試劑中的應(yīng)用，具體涉及一種為通過(guò)檢測(cè)血清中miRNA的表達(dá)水平來(lái)診斷血脂異常肝郁證的試劑的應(yīng)用，所述試劑基于定量PCR方法檢測(cè)血脂異常肝郁證樣本中miRNA的靶基因的表達(dá)情況，所述miRNA的靶基因的表達(dá)情況為15個(gè)上調(diào)miRNA及9個(gè)下調(diào)miRNA。本發(fā)明所述試劑可應(yīng)用于預(yù)防或診斷由肝郁脾虛證引發(fā)的血脂異常。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種miRNA在制備預(yù)防或診斷血脂異常肝郁證試劑中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

血脂是血漿中所有脂質(zhì)的總稱(chēng)，高脂血癥(hyperlipidemia)是由于脂肪代謝或運(yùn)轉(zhuǎn)異常導(dǎo)致血漿中血脂水平過(guò)高，可表現(xiàn)為高膽固醇血癥(hypercholesterolemia)、高甘油三酯血癥(hypertriglyceridemia)和兩者皆有(混合性高脂血癥)。另外，高密度脂蛋白降低也是一種病理狀態(tài)。與上述血脂代謝紊亂統(tǒng)稱(chēng)為血脂異常(dyslipidemia)。如果血脂過(guò)多，容易造成“血稠”，在血管壁上沉積，逐漸形成小斑塊，這些“斑塊”增多、增大，逐漸堵塞血管，使血流變慢，嚴(yán)重時(shí)血流被中斷。這種情況如果發(fā)生在心臟，就引起冠心病；發(fā)生在腦，就會(huì)出現(xiàn)腦中風(fēng)；如果堵塞眼底血管，將導(dǎo)致視力下降、失明；如果發(fā)生在腎臟，就會(huì)引起腎動(dòng)脈硬化，腎功能衰竭；發(fā)生在下肢，會(huì)出現(xiàn)肢體壞死、潰爛等。此外，高血脂9可引發(fā)高血壓、誘發(fā)膽結(jié)石、胰腺炎，加重肝炎、導(dǎo)致男性性功能障礙、老年癡呆等疾病。最新研究提示高血脂可能與癌癥的發(fā)病有關(guān)。血脂異常是現(xiàn)代社會(huì)中常見(jiàn)疾病，大量文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)，高脂血癥證素分布與“肝”密切相關(guān)，本課題組前期通過(guò)對(duì)廣東地區(qū)高脂血癥中醫(yī)證候分布規(guī)律進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)廣東地區(qū)血脂異常人群中“肝郁脾虛證”最為常見(jiàn)，占36.1％[1]。

miRNA是一類(lèi)由內(nèi)源基因編碼的長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，它們?cè)趧?dòng)植物中參與轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，多種miRNA參與調(diào)節(jié)脂質(zhì)合成、分解及轉(zhuǎn)運(yùn)等過(guò)程，并在血脂異常患者中表達(dá)量發(fā)生變化，在脂質(zhì)代謝相關(guān)疾病研究中發(fā)揮重要作用。從分子水平揭示肝郁脾虛證的發(fā)病機(jī)制，可為及早發(fā)現(xiàn)因“肝郁脾虛證”引發(fā)的血脂異常的危險(xiǎn)人群、預(yù)防血脂異常的發(fā)生提供幫助。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供miRNA在制備預(yù)防或診斷血脂異常肝郁證試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明公開(kāi)了一種miRNA在制備預(yù)防或診斷血脂異常肝郁證試劑中的應(yīng)用，進(jìn)一步地，所述試劑通過(guò)檢測(cè)血清中miRNA的表達(dá)水平來(lái)診斷血脂異常肝郁證的產(chǎn)品。

進(jìn)一步地，所述試劑基于定量PCR方法檢測(cè)血脂異常肝郁證樣本中miRNA的靶基因的表達(dá)情況。

更進(jìn)一步的，所述血脂異常肝郁證樣本中miRNA的靶基因的表達(dá)情況為15個(gè)上調(diào)miRNA miR-382-5p、miR-432-5p、let-7f-5p、miR-454-3p、miR-374a-5p、miR-126-5p、let-7a-5p、miR-142-3p、miR-26a-5p、miR-27b-3p、miR-27a-3p、let-7d-5p、miR-652-3p、miR-148a-3p、miR-30e-5p，有9個(gè)下調(diào)miRNA miR-34c-5p、miR-181c-5p、miR-193b-3p、miR-129-2-3p、miR-149-5p、miR-542-5p、miR-133a、miR-133b、miR-124-3p。

進(jìn)一步的，所述定量PCR方法檢測(cè)miRNA表達(dá)情況包括如下步驟：

步驟1，利用miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Exiqon，Danmark)將20-25ng的總RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA；

步驟2，在定量PCR儀上對(duì)cDNA進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增,Real-time PCR循環(huán)條件：