[發(fā)明專利]ND4基因重組腺相關(guān)病毒載體及其制備方法和應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910542330.6 | 申請日： | 2019-06-21 |
| 公開（公告）號： | CN112111518A | 公開（公告）日： | 2020-12-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李斌 | 申請（專利權(quán)）人： | 武漢紐福斯生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/864 | 分類號： | C12N15/864;C12N15/62;A61K48/00;A61K38/44;A61K47/64;A61P27/02;A61P25/02 |
| 代理公司： | 上海弼興律師事務(wù)所 31283 | 代理人： | 王衛(wèi)彬;黃益澍 |
| 地址： | 430040 湖北省武漢市東湖新技術(shù)開發(fā)區(qū)高新大道666號*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | nd4 基因 重組 相關(guān) 病毒 載體 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種包含ND4基因表達盒的重組腺相關(guān)病毒載體，其特征在于，所述重組腺相關(guān)病毒載體的骨架為pAAV5，所述ND4基因表達盒包含人ND4基因或優(yōu)化的人ND4基因。
2.如權(quán)利要求1所述的重組腺相關(guān)病毒載體，其特征在于，所述ND4基因表達盒從N端至C端依次包含啟動子、線粒體靶向序列、人ND4基因或優(yōu)化的人ND4基因、和/或UTR序列。
3.如權(quán)利要求2所述的重組腺相關(guān)病毒載體，其特征在于，所述啟動子為CMV啟動子或CAG啟動子；所述啟動子的核苷酸序列優(yōu)選如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7所示。
4.如權(quán)利要求2所述的重組腺相關(guān)病毒載體，其特征在于，所述線粒體靶向序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10所示；和/或，所述UTR序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。
5.如權(quán)利要求2所述的重組腺相關(guān)病毒載體，其特征在于，所述人ND4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，所述優(yōu)化的人ND4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:11所示。
6.如權(quán)利要求2所述的重組腺相關(guān)病毒載體，其特征在于，所述ND4基因表達盒的核苷酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示；或者所述ND4基因表達盒的核苷酸序列從N端至C端依次為SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6，或SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:6，或SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:6，或SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:6，或SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6，或SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:6，或SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6，或SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:6，或SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:6，或SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:6，或SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6，或SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:6，或SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6，或SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:6，或SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:6，或SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:6。
7.一種轉(zhuǎn)化體，其特征在于，將如權(quán)利要求1～6任一項所述的重組腺相關(guān)病毒載體導(dǎo)入宿主，并使之整合在所述宿主的基因組上；較佳地，所述宿主為哺乳動物細胞；更佳地，所述哺乳動物細胞為HEK293細胞。
8.一種制備如權(quán)利要求1～6任一項所述的重組腺相關(guān)病毒載體的方法，其特征在于，所述方法包含以下步驟：將所述ND4基因表達盒插入到腺相關(guān)病毒載體pAAV5中即得。
9.一種制備ND4融合蛋白的方法，其特征在于，其包括以下步驟：
(1)制備如權(quán)利要求7所述的轉(zhuǎn)化體；
(2)篩選重組子，獲得陽性克隆，表達并純化ND4融合蛋白。
10.如權(quán)利要求1～6任一項所述的重組腺相關(guān)病毒載體在制備治療Leber遺傳性視神經(jīng)病變的藥物中的應(yīng)用。
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