[發明專利]一種趨氧受體基因aer功能喪失的大腸桿菌菌株及制備方法

在審

• 申請號: 201910542257.2
• 申請日: 2019-06-21
• 公開（公告）號: CN110283767A
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 江楠;王松太;郭書奎;楊雪
• 申請（專利權）人: 武漢生物工程學院
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/90;C12R1/19
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 彭勁松

本發明公開了一種趨氧受體基因aer功能喪失的大腸桿菌菌株及制備方法。屬于生物技術工程領域，具體涉及利用λ?Red重組酶方法，對編碼大腸桿菌趨氧性受體基因aer進行敲除，使之喪失趨氧性，構建一個大腸桿菌趨氧受體基因aer功能喪失菌株模型。用于研究細菌的侵染過程，治理病害；為治理環境污染，凈化污水提供理論依據。

技術領域

本發明屬于生物技術工程領域，具體涉及通過大腸桿菌aer基因被敲除而喪失趨氧受體基因，致使該菌喪失對氧氣的趨化性功能。

背景技術

趨化性是細菌調控對外界環境做出適應性反應的感受系統之一，有運動能力的細菌對濃度不同的化學物質做出反應，使之趨向有利的環境，或逃避有害與不利的環境。趨氧性(或者能量趨性)是趨化性的一種，是一種能引導細菌自動定位并移動于某處，從而使它們可以達到最佳胞內氧水平。這種趨氧性是通過呼吸鏈完成的，由此可見趨氧性傳感器對各類細菌的生命活動極為重要。運動型細菌大多具有這種趨氧性，并且趨氧性在細菌的生命周期中具有重要的生物學功能。大腸桿菌中編碼趨氧性受體基因是aer。研究細菌的趨化性，構建大腸桿菌趨氧受體基因aer功能喪失模型，對研究控制細菌的侵染過程，治理病害；治理環境污染，凈化污水；以及研究治療癌癥等疾病都有重要意義。

發明內容

為了克服現有技術中存在的不足，本發明的目的是提供一種趨氧受體基因aer功能喪失的大腸桿菌菌株，利用λ-Red重組酶方法，對編碼大腸桿菌趨氧性受體基因aer進行敲除，使之喪失趨氧性，構建一個大腸桿菌趨氧受體基因aer功能喪失菌株模型。用于研究細菌的侵染過程，治理病害；為治理環境污染，凈化污水提供理論依據。

本發明的另一目的是提供制備上述大腸桿菌菌株的方法。

為了實現上述目的本發明采用如下技術方案：

第一方面，提供一種趨氧受體基因aer功能喪失的大腸桿菌菌株的制備方法，包括以下步驟：

(1)設計引物：

用于同源重組的引物為Aer-tet-R和Aer-tet-F；設計原則是5'端為aer基因的同源區(未加下劃線)，3'端為四環素抗性基因tetRA的同源序列(加下劃線)，重組體的檢測所用引物為JC-Aer-R及JC-Aer-F，這些引物的序列如下所示：

Aer-tet-R:ATCAGGCATTGTGCTCCAACCGCCCGGATCCGGCATACCGACTAAGCACTTGTCTCCTG；

Aer-tet-F:CAAGAAGTTAACAACCATATAACCTGCACAGGACGCGAACTTAAGACCCACTTTCACA；

JC-Aer-R:AAGATGCGCCAGCATCGC；

JC-Aer-F:GGCCGACATAAACTCTGA；

(2)含tetRA基因的DNA片段的擴增：

以含有四環素抗性基因的大腸桿菌DH10Bac(Tet⁺，Kan⁺，購自武漢淼靈生物科技有限公司)的DNA為模板，Aer-tet-R和Aer-tet-F為引物進行PCR擴增，獲得兩端分別與aer基因上、下游同源，中間為四環素抗性基因tetRA的DNA片段。將該片段進行瓊脂糖凝膠回收，以用于下一步電轉化。

(3)感受態細胞的制備：