[發明專利]一種穩定的同型半胱氨酸循環酶法檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201910542059.6
• 申請日: 2019-06-21
• 公開（公告）號: CN110308282B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 張勇
• 申請（專利權）人: 中生北控生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48;G01N33/68
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

本發明提供一種穩定的同型半胱氨酸循環酶法檢測試劑盒，所述試劑盒包括試劑R1與R2，其中試劑R1由緩沖液，表面活性劑，保護劑，抗氧化劑，乙二胺四乙酸二鈉，三(2?羰基乙基)磷鹽酸鹽，S?腺苷甲硫氨酸，α?酮戊二酸，還原型輔酶和防腐劑組成，試劑R2由緩沖液，表面活性劑，保護劑，S?腺苷同型半胱氨酸水解酶，Hcy甲基轉移酶，腺苷脫氨酶，谷氨酸脫氫酶和防腐劑組成。本發明提供的試劑盒由于表面活性劑和保護劑、抗氧化劑的協同作用，使其相較市售HCY試劑盒，具有精密度好、靈敏度高、線性范圍寬和穩定性好等優點，為臨床HCY相關疾病的輔助診斷提供重要依據。

技術領域

本發明涉及生化診斷試劑制備領域，具體地說，涉及一種穩定的同型半胱氨酸循環酶法檢測試劑盒。

背景技術

同型半胱氨酸(HCY)又稱高半胱氨酸，是一種含巰基的氨基酸，屬于蛋氨酸和半胱氨酸代謝過程中產生的重要中間產物。HCY在人體血漿中以兩種形式存在，氧化型同型半胱氨酸和還原型同型半胱氨酸。還原型同型半胱氨酸中游離的巰基具有很高的活性，其容易被氧化而形成二硫化物形式；氧化型是同型半胱氨酸在血漿中的主要存在形式，以二硫化物形式或與蛋白質結合形式存在。正常情況下，血液中同型半胱氨酸在體內能被分解代謝，濃度維持在較低水平。但在原發性和繼發性疾病的影響下，導致血同型半胱氨酸濃度升高，高濃度的HCY可使氧化自由基大量產生引起內皮細胞損傷，使脂質過氧化和氧化型的低密度增加，從而造成血管的損傷和破壞，破損的血管壁增多引起斑塊，導致心血管、動脈粥樣硬化和中風等疾病。大量研究表明，高同型半胱氨酸血癥在動脈粥樣硬化和血栓性疾病如腦血管疾病、冠心病和靜脈血栓等發病機制中起重要作用。

同型半胱氨酸的測定方法主要有高效液相色譜法(HPLC法)、氣相色譜-質譜法(GC-MS法)、酶免疫檢測法(ELA法)、熒光偏振免疫檢測法(FPLA法)和循環酶法。色譜法具有很高的準確度和穩定性，然而，對標本的處理和操作人員、設備維護要求較高，通常作為同型半胱氨酸的參考方法，而不能用于常規樣本的檢測；酶聯免疫法的靈敏度高、特異性強，但是操作繁瑣，精密度差，耗費時間長，不適合大量樣本的檢測；熒光偏振免疫檢測法，需要配備專用的檢測儀器，單次檢測成本較高；循環酶法可用于大型生化分析儀，操作簡便，精密度好，目前適合臨床檢測。

目前循環酶法包括水解酶法和胱硫醚法兩種方法。胱硫醚法因不能消除正常代謝的β-胱硫醚，尤其對于腎臟疾病患者會產生特別高的β-胱硫醚，從而導致檢測結果的不準確。水解酶法，特異性高，抗干擾能力強，能消除體內代謝β-胱硫醚，檢測結果更為準確。市場上水解酶試劑多為國外公司壟斷，造成高昂的檢測成本，因此，亟需開發一種抗干擾能力強，準確度高，成本低廉的HCY檢測試劑。

發明內容

本發明的目的是提供一種穩定的同型半胱氨酸循環酶法檢測試劑盒。

為了實現本發明目的，本發明提供穩定的同型半胱氨酸(雙試劑)循環酶法檢測試劑盒，所述試劑盒包括試劑R1與R2，為生化分析儀上使用的液體雙試劑；

所述試劑R1的配方為：20-200mM、pH7.5～9.5的緩沖液，表面活性劑0.5-5g/L，保護劑0.5-20g/L，抗氧化劑0.05-50mM，乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)0.2-20mM，三(2-羰基乙基)磷鹽酸鹽(TCEP)0.2-10mM，S-腺苷甲硫氨酸(SAM)0.05-5mM，α-酮戊二酸(α-KG)1-20mM，NADH(還原型輔酶I)0.1-10mM，防腐劑0.5-2g/L；

所述試劑R2的配方為：20-200mM、pH7.5～9.5的緩沖液，表面活性劑0.5-20g/L，保護劑0.5-5g/L，S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHase)1-10KU/L，Hcy甲基轉移酶(HMTase)2-20KU/L，腺苷脫氨酶(ADA)1-10KU/L，谷氨酸脫氫酶(GLDH)1-20KU/L，防腐劑0.5-2g/L；

其中，所述緩沖液選自硼酸緩沖液、三乙醇胺緩沖液、Tris緩沖液、MES緩沖液、HEPES緩沖液、PIPES緩沖液、CAPSO-Na緩沖液、PBS緩沖液等中的至少一種。