[發(fā)明專利]一種利用轉鐵蛋白受體1評價低劑量伽馬射線輻射損傷的方法

有效

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• 申請日: 2019-06-21
• 公開（公告）號: CN110221335B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發(fā)明（設計）人: 丁德馨;胡南;殷杰;趙維超;易嵐;龍鼎新;李廣悅
• 申請（專利權）人: 南華大學
• 主分類號: G01T1/02
• 分類號: G01T1/02;G01N33/50
• 代理公司: 湖南省國防科技工業(yè)局專利中心 43102
• 代理人: 馮青

1.一種利用轉鐵蛋白受體1評價低劑量伽馬射線輻射損傷的方法，利用人體外周血AHH1淋巴細胞中TFRC1對低劑量伽馬射線輻射非常敏感的特性，根據人體外周血AHH1淋巴細胞接受的低劑量伽馬射線輻射劑量與TFRC1的相對表達量的上調率的劑量-效應關系，通過檢測人體外周血AHH1淋巴細胞中TFRC1的相對表達量的上調率，評估低劑量伽馬射線輻射對人體血液的生物損傷，其特征在于，具體步驟包括：

（1）人體外周血AHH1淋巴細胞的培養(yǎng)；

（2）伽馬射線輻射；

（3）TFRC1的相對表達量上調率的檢測；

（4）輻射損傷綜合評價；

所述的人體外周血AHH1淋巴細胞的培養(yǎng)具體方法為：

人體外周血淋巴細胞AHH1，用含10%血清IMDM培養(yǎng)液中，置于37℃，5% 二氧化碳培養(yǎng)箱，每隔3 天換一次培養(yǎng)液，每隔3-5天進行一次細胞傳代，取對數生長期細胞進行實驗；

所述的伽馬射線輻射具體方法為：

將細胞密度調整為6×10⁵細胞/ml，再取用6×10⁶個細胞，將其移至新培養(yǎng)瓶，放在劑量率為14μGy/h的伽馬射線下進行持續(xù)輻照，分別收集持續(xù)輻照0、7、21、42和56天的外周血AHH1淋巴細胞，輻照劑量分別為0、2.4、7.2、14.1和18.8 mGy，

所述的TFRC1的相對表達量上調率的檢測具體方法為：

將收集的受過低劑量伽馬射線輻照的外周血AHH1淋巴細胞進行蛋白提取、總蛋白濃度測定、蛋白質變性、凝膠電泳、轉膜、免疫反應、化學發(fā)光反應、凝膠成像掃描分析、最后進行TFRC1的相對表達量上調率分析，

TFRC1相對表達量上調率按公式（1）進行計算，

（1）

所述輻射損傷綜合評價的方法是：

采用TFRC1相對表達量上調率來評估低劑量伽馬射線輻射對人體外周血的生物損傷，當人體外周血淋巴細胞AHH-1中的TFRC1相對表達量上調率小于10%時，表明低劑量伽馬射線輻射對人體外周血無損傷；當人體外周血淋巴細胞AHH-1TFRC1相對表達量上調率大于10%而小于30%時，此時的低劑量伽馬射線輻射的損傷等級為Ⅰ級；當人體外周血淋巴細胞AHH-1中的TFRC1相對表達量上調率大于30%而小于60%時，此時的低劑量伽馬射線輻射的損傷等級為Ⅱ級；當人體外周血淋巴細胞AHH-1中的TFRC1相對表達量上調率大于60%時，此時的低劑量伽馬射線輻射的損傷等級為Ⅲ級。

2.根據權利要求1所述的一種利用轉鐵蛋白受體1評價低劑量伽馬射線輻射損傷的方法，其特征在于，所述的蛋白提取具體步驟如下：

倒掉培養(yǎng)液，并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養(yǎng)液，每瓶細胞加3ml 4^oC預冷的PBS平放輕輕搖動1min洗滌，然后棄去洗液，重復以上操作兩次，洗去培養(yǎng)液，將PBS棄凈后把培養(yǎng)瓶置于冰上，1ml裂解液加10ulPMSF，搖勻置于冰上，每瓶加400ul含PMSF的裂解液，于冰上裂解30min，裂解完后，移至離心管，離心5min，上清于離心管保存。

3.根據權利要求1所述的一種利用轉鐵蛋白受體1評價低劑量伽馬射線輻射損傷的方法，其特征在于，所述的總蛋白濃度測定的具體步驟如下：

將0.2 mg/ml BSA 標準品溶液加稀釋液依次稀釋成0、5、10、20、50、100、150和200 μg/ml 的標準品溶液，然后測定它們在562 nm下的吸光度值，繪制標準曲線，測定每個樣品溶液562 nm下的吸光度值后，最后通過標準曲線計算出樣品中蛋白質的濃度。

4.根據權利要求1所述的一種利用轉鐵蛋白受體1評價低劑量伽馬射線輻射損傷的方法，其特征在于，所述的蛋白質變性的具體步驟如下：

將蛋白質溶液按照4:1的比例加入5×蛋白質上樣緩沖液，沸水浴變性15 min，放入-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>