[發(fā)明專利]一種腸菌外膜囊泡在制備癡呆動物模型中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910537025.8
• 申請日: 2019-06-20
• 公開（公告）號: CN110367202B
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉洲;魏守超;彭萬娟;趙斌;李康蘭;胡利
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027
• 代理公司: 北京匯彩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11563
• 代理人: 李艷杰

本發(fā)明公開了一種腸菌外膜囊泡(OMVs)在制備癡呆動物模型中的應(yīng)用，從罹患癡呆的阿爾茨海默病(AD)患者糞便中提取的OMVs作為腸道和大腦之間的媒介物，加重GSK?3β和tau高磷酸化、海馬神經(jīng)炎癥，從而導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)癡呆行為改變。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種腸菌外膜囊泡在制備癡呆動物模型中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

阿爾茨海默病(AD)是一種影響全球數(shù)千萬人的重要疾病，是最常見的癡呆類型，其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。AD是一種持續(xù)時間長、進(jìn)展緩慢的疾病，而糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)參與病理生理過程的調(diào)節(jié)可能是一個關(guān)鍵因素。GSK-3β誘導(dǎo)神經(jīng)炎癥、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡等，增加乙酰膽堿酯酶、磷酸化tau蛋白活性，形成雙螺旋絲。此外，還發(fā)現(xiàn)使用GSK-3β抑制劑可以緩解神經(jīng)炎癥的病理過程，減少淀粉樣蛋白異常聚集。鑒于GSK-3β是AD發(fā)病機(jī)制中的一種重要蛋白，它已成為研究的熱點(diǎn)，有助于揭開AD的神秘面紗。,

腸道細(xì)菌(GM)與中樞神經(jīng)系統(tǒng)(“微生物-腸道-腦軸”)的相互作用是目前研究的熱點(diǎn)，而AD與GM的異常組成有關(guān)。大多數(shù)情況下，GM的代謝產(chǎn)物，如短鏈脂肪酸，會以多種方式影響神經(jīng)系統(tǒng)。然而，作用于大腦的具體物質(zhì)、機(jī)制和信號通路仍需進(jìn)一步研究。

由細(xì)菌分泌的外膜囊泡(OMVs)，直徑20-250nm，攜帶細(xì)菌的脂多糖(LPS)、蛋白酶、膜受體、DNA、RNA和ETC。有幾項(xiàng)研究證實(shí)了OMVs在宿主信息通信和調(diào)節(jié)中起著至關(guān)重要的作用，甚至可以推測OMVs與AD存在相關(guān)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種腸菌外膜囊泡在制備癡呆動物模型中的應(yīng)用，從AD患者糞便中提取的OMVs是否可以作為腸道和大腦之間的媒介物，加重GSK-3β和tau高磷酸化、海馬神經(jīng)炎癥，從而可能誘發(fā)癡呆行為改變。

為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種腸菌外膜囊泡在制備癡呆動物模型中的應(yīng)用，其特征在于，將阿爾茨海默病患者的腸菌外膜囊泡用于構(gòu)建癡呆動物模型。

進(jìn)一步地，所述腸菌外膜囊泡來自于阿爾茨海默病患者的糞便。

進(jìn)一步地，所述腸菌外膜囊泡的模式直徑為100-120nm。

進(jìn)一步地，所述腸菌外膜囊泡的提取和純化方法為：將阿爾茨海默病患者的糞便充分?jǐn)嚢璩蓾{液，勻漿轉(zhuǎn)移至玻璃壇中，濾網(wǎng)過濾2次，過濾后將濾液分裝至50ml離心管中，1200g，4℃離心5min；離心后取上清液，3000g，4℃離心20min；離心后取上清液，6000g，4℃離心40min；離心后取上清液，10000g，4℃離心1h；離心后取上清液，15000g，4℃離心1h；離心后取上清液，用0.45μm膜過濾器過濾上清液，取濾液，用0.22μm膜過濾器過濾，取濾液。濾液集中裝到耐超高速離心管中，170000g，4℃超高速離心2h，離心后去濾液，沉淀用0.5MPBS重懸。

進(jìn)一步地，所述癡呆動物模型的動物為小鼠。

進(jìn)一步地，所述癡呆動物模型的動物血腦屏障損傷，學(xué)習(xí)記憶功能明顯受損,出現(xiàn)癡呆行為改變。

進(jìn)一步地，所述癡呆動物模型的動物的炎癥因子、腫瘤壞死因子α的表達(dá)顯著增加。

進(jìn)一步地，所述癡呆動物模型的動物的海馬中IBA1和GFAP陽性細(xì)胞，IBA1和GFAP蛋白表達(dá)增加。

進(jìn)一步地，所述腸菌外膜囊泡加重癡呆動物模型的動物的GSK-3β和tau高磷酸化、海馬神經(jīng)炎癥。

本發(fā)明具有以下有益效果：