[發明專利]抗MSH2蛋白單克隆抗體、細胞系及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201910529447.0
• 申請日: 2019-06-19
• 公開（公告）號: CN110218251B
• 公開（公告）日: 2022-10-25
• 發明（設計）人: 李恢波;王小亞;李玲玲;吳茂;楊清海
• 申請（專利權）人: 福州邁新生物技術開發有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/68
• 代理公司: 福州市景弘專利代理事務所(普通合伙) 35219
• 代理人: 林祥翔;黃以琳

本發明涉及生物檢測領域，提供了一種抗MSH2蛋白單克隆抗體,其重鏈和輕鏈可變區的氨基酸序列分別是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。發明人還提供了抗MSH2蛋白單克隆抗體的制備方法，選取人MSH2氨基酸第411?424位蛋白并與KLH偶聯，作為免疫原。發明人還提供了一株分泌抗MSH2蛋白的雜交瘤細胞系，所述細胞系為小鼠雜交瘤細胞系1B11?14?16，保藏號為：CGMCC NO.17405。抗MSH2蛋白單克隆抗體,具有高特異性、敏感性，可以特異性識別表達MSH2蛋白的細胞，適用于免疫學檢測，特別是免疫組化檢測。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，特別涉及抗MSH2蛋白單克隆抗體、細胞系及其制備方法和應用。

背景技術

DNA錯配修復系統(MMR)是由特異修復DNA堿基錯配的酶分子組成。研究顯示，MMR基因的突變和(或)功能缺失與多種腫瘤的發生相關，如結直腸癌、皮膚癌、卵巢癌、子宮內膜癌等。MSH2(MutS homolog 2)基因是最早發現、也是學者們研究MMR基因時聚焦的焦點之一，是MMR系統中的“管家基因”，其具有識別錯配的功能，長3111bp的cDNA含有2802bp的開放閱讀框，編碼的蛋白中含有934個氨基酸。MSH6是錯配修復家族的重要成員之一，DNA全長23806bp，cDNA長4200bp，主要作用是糾正堿基錯配以及小片段插入和缺失。當DNA發生錯配時，MSH6蛋白與MSH2蛋白結合生成能對錯配位點進行識別的MutS-α異二聚體，該二聚體與錯配位點結合后啟動錯配修復過程，從而保證微衛星穩定性，將細胞內基因的自發突變率控制在較低水平，使基因組遺傳的穩定性和真實性得到保障。

MSH2蛋白幾乎出現于所有結腸正常粘膜，陽性率達94％。陽性產物定位于核內，部分細胞同時出現胞漿染色。陽性細胞分布于粘膜全層，以腺窩下1/3-2/3中排列更為密集。杯裝細胞中偶見MSH2蛋白的表達。MSH2蛋白也表達在間質纖維母細胞、血管內皮細胞以及淋巴細胞上，呈核型或核漿型，但漿細胞內表達較少。

MSH2基因的突變與微衛星不穩定性和一些癌癥有關，研究發現MSH2基因蛋白陽性表達率從正常組織、腺瘤不典型增生、腺瘤癌變到腺癌逐漸降低，提示在腺瘤階段已經有MMR的基因的突變或功能異常，并隨其惡性程度的增加，MMR基因的突變頻率也逐漸升高。表明MMR基因的突變，尤其是MSH2的突變可能是結直腸癌發生的早期事件之一。其中遺傳性非息肉病性結直腸癌(HNPCC)一種特殊類型的結直腸癌。遺傳性非息肉病性結直腸癌(HNPCC)，有時稱為Lynch綜合征，以常染色體顯性遺傳方式遺傳，其中僅突變錯配修復基因的一個拷貝的遺傳就足以引起疾病表型，約占結直腸癌總數的15％～18％，占家族性結直腸癌的50％。MSH2基因的突變占該疾病相關基因改變的40％，與HNPCC相關的突變廣泛分布在MSH2的所有結構域中，并且是MLH1突變的主要原因。另外MSH2和其他錯配修復基因的突變也會導致DNA損傷未修復，導致突變頻率增加。

發明內容

發明人提供了一種抗MSH2蛋白單克隆抗體，所述單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區的氨基酸序列分別是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。

進一步地，所述單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區氨基酸序列分別是SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列所編碼。

進一步地，所述單克隆抗體特異性識別MSH2蛋白。

進一步地，所述單克隆抗體特異性識別中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

進一步地，所述單克隆抗體由保藏號為CGMCC NO.17405的雜交瘤細胞系產生。所述細胞株為小鼠雜交瘤細胞系1B11-14-16，分類命名為：小鼠雜交瘤細胞系，該細胞系已于2019年03月21日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所。

進一步地，所述抗MSH2蛋白為小鼠IgG_2b亞型單克隆抗體。