[發(fā)明專利]基于FTA卡采集和常溫保存肋軟骨DNA的方法和工具

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910523371.0
• 申請日: 2019-06-17
• 公開（公告）號: CN110343738A
• 公開（公告）日: 2019-10-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 賈霄;曹丹;王文雯;吳雅蘭
• 申請（專利權(quán)）人: 清遠市公安局
• 主分類號: C12Q1/24
• 分類號: C12Q1/24;C12M1/00
• 代理公司: 廣州恒華智信知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44299
• 代理人: 廖金燕

本發(fā)明基于FTA卡采集和常溫保存肋軟骨DNA的方法，其特征在于，其步驟包括：S1.采集尸體肋軟骨1?2cm，用經(jīng)過純水清洗過的手術(shù)刀剔除所述尸體肋軟骨周圍的結(jié)蹄組織和腐敗組織；S2.取步驟S1中處理后的尸體肋軟骨進行研磨處理，并滴入純水進行混合，制備成組織勻漿；S3.用海綿簽粘取適步驟S2中制備的組織勻漿涂抹于FTA卡上標示的圓環(huán)范圍內(nèi)，制備FTA樣本卡，并將其陰干；S4.將步驟S3中制備的FTA樣本卡裝入卡套和密封袋中，所述密封袋進行抽真空，進行密封保存。本發(fā)明能夠?qū)崿F(xiàn)提取DNA的方法操作簡單和材料易于存放，使得節(jié)約了提取時間，也避免了腐敗惡臭情況，降低了工作人員的健康風(fēng)險。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種基于FTA卡采集DNA的技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，涉及一種基于FTA卡采集和常溫保存肋軟骨DNA的方法和工具。

背景技術(shù)

在法醫(yī)物證日常檢案中,當腐敗尸體的心血、肌肉等組織無法檢出短STR結(jié)果時,提取其肋軟骨進行STR分型往往得到滿意的效果，尸體肋軟骨組織較軟組織不易腐敗，是一種常見的生物檢材，在災(zāi)難事故、群死群傷、未知名尸體等案事件中常作為首選生物檢材進行提取。

法醫(yī)DNA分型的研究和應(yīng)用最初是從長度多態(tài)性開始的，在早期，法醫(yī) DNA分型應(yīng)用限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)分析技術(shù)檢測小衛(wèi)星VNTR位點，構(gòu)建DNA指紋圖譜，90年代中期后，逐漸過渡到應(yīng)用PCR技術(shù)分析微衛(wèi)星STR座位的多態(tài)性，即STR分型技術(shù)。STR是目前法醫(yī)物證鑒定中常規(guī)使用的長度多態(tài)性遺傳標記，其等位基因片段長度多在400bp以下，采用PCR技術(shù)擴增成功率高，陽性率和檢測靈敏度大約比小衛(wèi)星VNTR高10倍，尤其適用于降解、陳舊和腐敗檢材的分型鑒定。

目前對肋軟骨組織的STR分型檢測一般是通過工作人員在現(xiàn)場提取尸體肋軟骨組織后，冷藏送到實驗室，然后由實驗室的鑒定人員采用Chelex100法提取獲得DNA，作為PCR試驗的模板。然而，該方法提取DNA步驟繁瑣、耗時、常常伴有惡臭，尸體肋軟骨上有害病菌增殖易導(dǎo)致了現(xiàn)場提取人員健康受到威脅，而且檢驗需冷凍保存，常年累積占據(jù)大量冷藏冷凍空間，一旦斷電或者出現(xiàn)冷藏設(shè)備故障，肋軟骨會加速腐敗甚至導(dǎo)致檢材滅失。

FTA(Flinders Technology Associates)卡是英國Whatman公司專利產(chǎn)品，為室溫下收集、運輸和儲存DNA提供了穩(wěn)妥、安全、可靠的方法。有研究表明，F(xiàn)TA 卡可作為一種通用、快速、簡便的DNA模板制備方法，F(xiàn)TA卡中含有特殊的化學(xué)物質(zhì)，當樣品吸附在卡上時，細胞膜和細胞器被裂解，蛋白質(zhì)變性，釋放出的核酸被捕獲在FTA卡纖維上，從而免受核酸酶、氧化劑和紫外線損傷。FTA 卡可以快速地使有機體(包括血液中的各種病原體)失活，并抑制細菌和其它微生物的生長，基因組DNA可在FTA卡上室溫條件下儲存17年以上，而不會降低擴增效率。另外，美國公司研發(fā)的FTA基因保藏系統(tǒng)在基因常溫保存方面也有很好的效果，可以長時間地保存基因樣品，在遠距離運輸基因樣品時而無須考慮環(huán)境溫度等條件對基因樣品的影響。

本發(fā)明建立一種基于FTA卡提取采集和常溫保存肋軟骨DNA的方法和工具，使得將肋軟骨制備成肋軟骨FTA卡的方法，使肋軟骨保存在FTA卡上，通過直擴法和真空物證袋密封，實現(xiàn)肋軟骨快速DNA檢驗和常溫長期保存。本發(fā)明可以替代傳統(tǒng)肋軟骨DNA提取的繁瑣步驟，可以解決肋軟骨組織在常溫下難以保存的難題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種基于FTA卡采集和常溫保存肋軟骨DNA的方法和工具，能夠?qū)崿F(xiàn)提取肋軟骨DNA的方法操作簡單和材料易于存放，使得節(jié)約了提取時間，避免了腐敗惡臭情況，降低了工作人員的健康風(fēng)險。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了下述技術(shù)方案：

基于FTA卡采集和常溫保存肋軟骨DNA的方法，其步驟包括：

S1.采集尸體肋軟骨1-2cm，用經(jīng)過純水清洗過的手術(shù)刀剔除所述尸體肋軟骨周圍的結(jié)蹄組織和腐敗組織；