[發(fā)明專利]基于FTA卡采集和常溫保存肋軟骨DNA的方法和工具

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• 申請日: 2019-06-17
• 公開（公告）號: CN110343738A
• 公開（公告）日: 2019-10-18
• 發(fā)明（設計）人: 賈霄;曹丹;王文雯;吳雅蘭
• 申請（專利權）人: 清遠市公安局
• 主分類號: C12Q1/24
• 分類號: C12Q1/24;C12M1/00
• 代理公司: 廣州恒華智信知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 44299
• 代理人: 廖金燕

本發(fā)明基于FTA卡采集和常溫保存肋軟骨DNA的方法，其特征在于，其步驟包括：S1.采集尸體肋軟骨1?2cm，用經(jīng)過純水清洗過的手術刀剔除所述尸體肋軟骨周圍的結蹄組織和腐敗組織；S2.取步驟S1中處理后的尸體肋軟骨進行研磨處理，并滴入純水進行混合，制備成組織勻漿；S3.用海綿簽粘取適步驟S2中制備的組織勻漿涂抹于FTA卡上標示的圓環(huán)范圍內，制備FTA樣本卡，并將其陰干；S4.將步驟S3中制備的FTA樣本卡裝入卡套和密封袋中，所述密封袋進行抽真空，進行密封保存。本發(fā)明能夠實現(xiàn)提取DNA的方法操作簡單和材料易于存放，使得節(jié)約了提取時間，也避免了腐敗惡臭情況，降低了工作人員的健康風險。

技術領域

本發(fā)明涉及一種基于FTA卡采集DNA的技術領域，更具體地說，涉及一種基于FTA卡采集和常溫保存肋軟骨DNA的方法和工具。

背景技術

在法醫(yī)物證日常檢案中,當腐敗尸體的心血、肌肉等組織無法檢出短STR結果時,提取其肋軟骨進行STR分型往往得到滿意的效果，尸體肋軟骨組織較軟組織不易腐敗，是一種常見的生物檢材，在災難事故、群死群傷、未知名尸體等案事件中常作為首選生物檢材進行提取。

法醫(yī)DNA分型的研究和應用最初是從長度多態(tài)性開始的，在早期，法醫(yī) DNA分型應用限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)分析技術檢測小衛(wèi)星VNTR位點，構建DNA指紋圖譜，90年代中期后，逐漸過渡到應用PCR技術分析微衛(wèi)星STR座位的多態(tài)性，即STR分型技術。STR是目前法醫(yī)物證鑒定中常規(guī)使用的長度多態(tài)性遺傳標記，其等位基因片段長度多在400bp以下，采用PCR技術擴增成功率高，陽性率和檢測靈敏度大約比小衛(wèi)星VNTR高10倍，尤其適用于降解、陳舊和腐敗檢材的分型鑒定。

目前對肋軟骨組織的STR分型檢測一般是通過工作人員在現(xiàn)場提取尸體肋軟骨組織后，冷藏送到實驗室，然后由實驗室的鑒定人員采用Chelex100法提取獲得DNA，作為PCR試驗的模板。然而，該方法提取DNA步驟繁瑣、耗時、常常伴有惡臭，尸體肋軟骨上有害病菌增殖易導致了現(xiàn)場提取人員健康受到威脅，而且檢驗需冷凍保存，常年累積占據(jù)大量冷藏冷凍空間，一旦斷電或者出現(xiàn)冷藏設備故障，肋軟骨會加速腐敗甚至導致檢材滅失。

FTA(Flinders Technology Associates)卡是英國Whatman公司專利產(chǎn)品，為室溫下收集、運輸和儲存DNA提供了穩(wěn)妥、安全、可靠的方法。有研究表明，F(xiàn)TA 卡可作為一種通用、快速、簡便的DNA模板制備方法，F(xiàn)TA卡中含有特殊的化學物質，當樣品吸附在卡上時，細胞膜和細胞器被裂解，蛋白質變性，釋放出的核酸被捕獲在FTA卡纖維上，從而免受核酸酶、氧化劑和紫外線損傷。FTA 卡可以快速地使有機體(包括血液中的各種病原體)失活，并抑制細菌和其它微生物的生長，基因組DNA可在FTA卡上室溫條件下儲存17年以上，而不會降低擴增效率。另外，美國公司研發(fā)的FTA基因保藏系統(tǒng)在基因常溫保存方面也有很好的效果，可以長時間地保存基因樣品，在遠距離運輸基因樣品時而無須考慮環(huán)境溫度等條件對基因樣品的影響。

本發(fā)明建立一種基于FTA卡提取采集和常溫保存肋軟骨DNA的方法和工具，使得將肋軟骨制備成肋軟骨FTA卡的方法，使肋軟骨保存在FTA卡上，通過直擴法和真空物證袋密封，實現(xiàn)肋軟骨快速DNA檢驗和常溫長期保存。本發(fā)明可以替代傳統(tǒng)肋軟骨DNA提取的繁瑣步驟，可以解決肋軟骨組織在常溫下難以保存的難題。

發(fā)明內容

本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術的不足，提供了一種基于FTA卡采集和常溫保存肋軟骨DNA的方法和工具，能夠實現(xiàn)提取肋軟骨DNA的方法操作簡單和材料易于存放，使得節(jié)約了提取時間，避免了腐敗惡臭情況，降低了工作人員的健康風險。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了下述技術方案：

基于FTA卡采集和常溫保存肋軟骨DNA的方法，其步驟包括：

S1.采集尸體肋軟骨1-2cm，用經(jīng)過純水清洗過的手術刀剔除所述尸體肋軟骨周圍的結蹄組織和腐敗組織；