[發明專利]草魚adiponectin A基因、編碼蛋白及其應用

有效

• 申請號: 201910522917.0
• 申請日: 2019-06-17
• 公開（公告）號: CN110257395B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發明（設計）人: 秦超彬;趙文麗;楊國坤;聶國興;楊麗萍;孟曉林;盧榮華
• 申請（專利權）人: 河南師范大學
• 主分類號: C12N15/16
• 分類號: C12N15/16;C07K14/575;C12N15/70;C12N1/21;C12P21/02;C07K1/34;A23K20/184;A23K50/80;C12R1/19
• 代理公司: 新鄉市平原智匯知識產權代理事務所(普通合伙) 41139
• 代理人: 路寬

本發明公開了一種草魚adiponectin A基因、編碼蛋白及其應用，屬于基因工程技術領域。本發明的技術方案要點為：草魚adiponectin A基因，該草魚adiponectin A基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，還公開了含有上述草魚adiponectin A基因的重組表達載體、重組菌株及其在制備草魚促生長劑或添加劑中的應用。本發明首次擴增編碼草魚adiponectin A蛋白的基因，并將該基因構建表達載體和重組大腸桿菌菌株，利用重組大腸桿菌菌種在體外獲得大量表達的草魚adiponectin A蛋白，該蛋白可以用于制備適合草魚使用的促生長劑或添加劑。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種草魚adiponectin A基因、編碼蛋白及其應用。

背景技術

脂肪組織不僅能夠儲存能量，還是一個功能活躍的內分泌器官。由脂肪細胞合成和分泌，并釋放到循環系統中的內分泌因子，被統稱為脂肪細胞因子，它們對糖類和脂質代謝的調控發揮著重要作用。脂聯素(adiponectin)是哺乳類血液中蛋白水平最高的脂肪細胞因子，它與其受體(AdipoR1和AdipoR2)結合后，能夠通過激活AMPK和PPARα等信號通路，改善胰島素抵抗，提高葡萄糖的攝入量，促進脂肪酸的β氧化作用。因此，脂聯素具有促進葡萄糖攝取、降血糖、抗脂肪肝病等生理功能。

草魚屬鯉形目，鯉科，雅羅魚亞科，草魚屬。草魚以其肉質細嫩、個體大、肌間刺少而備受消費者喜愛。在我國大宗淡水魚中，草魚養殖產量常年位居第一。目前草魚飼料還需要添加大量的動植物蛋白，但蛋白質成本高昂，而糖類和脂肪則價格較為低廉。糖類和脂肪可以減少用于供能所消耗的蛋白質，具有節約蛋白質的作用。飼料中適當提高糖類和脂質的含量，可以替代部分作為能源消耗的蛋白質，從而提高蛋白質的利用率。飼料中糖的含量過高也會引起生長緩慢，魚對糖的利用能力有限；脂類含量太高會導致脂肪肝，使肝功能減弱，解毒力下降。但目前在草魚人工養殖中還沒有一種能有效促進糖類和脂質利用的飼料添加劑。

發明內容

本發明的目的是提供了一種草魚adiponectin A基因及含有該基因的重組表達載體、重組菌株及其在制備草魚促生長劑或添加劑中的應用。

本發明為實現上述目的采用如下技術方案，草魚adiponectin A基因，該草魚adiponectin A基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本發明擴增了編碼草魚adiponectin A蛋白的基因，克隆的方法是常規的基因克隆方法，通過設計引物，利用草魚腎臟cDNA為模板，經過PCR后得到目的基因片段，對PCR產物進行回收后，將得到的目的基因片段連接到pMD19-T載體為pMD19-T-adiponectin A。

本發明提供了上述草魚adiponectin A基因編碼的草魚adiponectin A蛋白，該草魚adiponectin A蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本發明構建了含有編碼草魚adiponectin A蛋白的大腸桿菌表達載體，該表達載體的構建方法是按常規同源重組的方法。利用原核表達質粒pET22b為模板，通過PCR方法進行線性化；利用自己構建的pMD19-T-adiponectin A載體為模板，通過PCR方法在編碼草魚adiponectin A蛋白基因的兩側引入與載體克隆位點兩端完全一致的15bp同源序列，得到帶有酶切接頭的編碼草魚adiponectin A蛋白的基因。分別經分離純化后，將兩者進行同源重組連接，即構建成含有編碼草魚adiponectin A蛋白基因的表達載體pET22b-adiponectin A。

本發明還用上述含有編碼草魚adiponectin A蛋白的相應表達載體pET22b-adiponectin A構建了能夠高效表達草魚adiponectin A蛋白的大腸桿菌重組菌株。該重組菌株由含有編碼草魚adiponectin A蛋白基因的表達載體pET22b-adiponectin A轉化大腸桿菌BL21而得到的菌株，命名為pET22b-adiponectin A-BL21。