[發明專利]一種羊胰酶制備方法

在審

• 申請號: 201910514056.1
• 申請日: 2019-06-14
• 公開（公告）號: CN112080487A
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 李小明;金永生;姚亦明
• 申請（專利權）人: 蘇州融析生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/94
• 分類號: C12N9/94
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 黃春松

1.一種羊胰酶制備方法，包括如下步驟：

一、胰漿制備：將冷凍羊胰臟解凍并絞碎得胰漿糊狀物；

二、孵育：先向胰漿糊狀物中加入CaCl₂、NaCl、異丙醇，20℃下溫育24h；然后再加入異丙醇后在20℃下溫育48h；

三、提取分離：將第二步驟孵育后的胰漿糊狀物與1.5～3倍體積的50mM NaCl溶液混合，加入淀粉，在15℃-20℃下溫和攪拌3小時，然后離心除去組織和雜塊得胰酶清液；

四、超濾濃縮：將胰酶清液超濾濃縮，溫度15-20℃下，超濾膜的最大分子截留值為5-30KDa；

五、脫脂：將超濾濃縮后的胰酶溶液與石油醚混合脫脂；分液后真空干燥處理胰酶濃縮物，以除去殘留的石油醚；

六、干燥：脫脂后的胰酶濃縮物干燥制得羊胰酶粉末。

2.根據權利要求1所述的羊胰酶制備方法，其特征在于：第二步的孵育步驟中，先向胰漿中加入CaCl₂、NaCl和異丙醇，CaCl₂的加入量為胰漿質量的0.5%～2%，NaCl的加入量為胰漿質量的0.1%～1%，異丙醇的加入量為胰漿質量的10%，20℃下溫育24h；然后再加入異丙醇，異丙醇的加入量為胰漿質量的15%，在20℃下溫育48h。

3.根據權利要求1或2所述的羊胰酶制備方法，其特征在于：第五步的脫脂步驟中，石油醚的加入量為超濾濃縮后的胰酶溶液體積的1.0～2.0倍。

4.根據權利要求1或2所述的羊胰酶制備方法，其特征在于：第六步的干燥步驟中，采用噴霧干燥法，進行干燥。

5.根據權利要求1或2所述的羊胰酶制備方法，其特征在于：第三步的提取分離步驟中，淀粉的加入量為胰漿糊狀物質量的0.01%-1%。

6.根據權利要求3所述的羊胰酶制備方法，其特征在于：第五步的脫脂步驟中，將超濾濃縮后的胰酶溶液與石油醚混合脫脂一次，時間60分鐘，溫度控制在15℃-20℃。

7.根據權利要求1或2所述的羊胰酶制備方法，其特征在于：第四步驟中，納濾膜的最大分子截留值為30 KDa。