[發明專利]一種半定量唾液中尿素酶活性的快速檢測方法

在審

• 申請號: 201910512901.1
• 申請日: 2019-06-05
• 公開（公告）號: CN110455788A
• 公開（公告）日: 2019-11-15
• 發明（設計）人: 房艷;高俊海;付萌
• 申請（專利權）人: 譜尼測試集團北京科學技術研究院有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于快速檢測領域，涉及一種半定量唾液中尿素酶活性的快速檢測方法，尤其是涉及一種利用唾液中尿素酶與尿素的反應產物引發相應指標變化來半定量唾液中尿素酶活性的方法。無需對唾液進行處理，只需將唾液加入到測試溶液中，利用唾液中尿素酶與尿素的反應產物引發測試溶液顏色變化，便可實現目視法半定量唾液中尿素酶的活性。相比于常規方式，本方法無需預處理過程、操作簡便、便于攜帶運輸且成本較低，具有較高的便捷應用性能。

技術領域

本發明屬于快速檢測領域，涉及一種半定量唾液中尿素酶活性的快速檢測方法，尤其是涉及一種利用唾液中尿素酶與尿素的反應產物引發測試溶液顏色變化來半定量唾液中尿素酶活性的快速檢測方法。

背景技術

唾液是一種無色無味、具有黏性的液體，由口腔中三對唾液腺(腮腺、頜下腺、舌下腺)與一些小唾液腺分泌的液體混合組成。唾液中含有多種物質，蛋白、有機酸、激素等有機物及鈉、鉀、鎂等無機物占0.6％，水分占99.4％。其中，可離子化物質組成可調節唾液pH值，一般情況下，普通人唾液pH為6.0～7.9。

尿素酶是一種含鎳的寡聚酶，可由口腔內可能含有的唾液鏈球菌、內氏放線菌、沃氏葡萄球菌、幽門螺旋桿菌等細菌產生。尿素酶能夠引發多種人類疾病，與口腔相關的包括齲齒、牙周炎等，其它常見癥狀為胃炎、腎盂腎炎、尿路結石等。通常，口腔內的尿素酶被視為診斷性生物標志物，可用于評估早期口腔和全身疾病。

目前，尿素酶的檢測方法主要有納氏試劑比色法、拉曼光譜法、酚紅指示劑法、膠體金免疫層析法、精密試紙法等。納氏試劑含汞，拉曼光譜需使用硝酸銀等有毒試劑且設備普及率較低，因此兩種方法均未得到廣泛應用。酚紅指示劑法可以快速定性胃粘膜等活體組織中的尿素酶，暫時沒有關于使用該方法檢測唾液中尿素酶含量的相關研究。以膠體金免疫層析法為基礎的唾液測試板、精密試紙法均可實現唾液中尿素酶的定性檢測。但唾液中尿素酶的實際含量卻鮮有研究。因此，建立一種唾液中尿素酶活性的快速半定量檢測方法具有重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種半定量唾液中尿素酶活性的快速檢測方法，利用唾液中尿素酶與尿素的反應產物引發測試溶液顏色變化的原理，只需將采集的適量唾液加入到測試溶液中，混勻后靜置適當時間，便可實現目視法半定量唾液中尿素酶的活性的目的。

為了實現本發明的目的，本發明的技術方案如下：

a.使用塑料瓶采集不少于1mL唾液樣本；

b.使用吸管將1mL唾液樣本加入到測試溶液中，混勻，靜置；

c.目視法觀察測試溶液顏色變化，若5min內溶液呈現肉眼可見的紫紅色，則表明尿素酶活性不低于0.8U/mL；若30min內，溶液呈現肉眼可見的紫紅色，則表明尿素酶活性不低于0.5U/mL、不高于0.8U/mL；若17h內，溶液呈現肉眼可見的紫紅色，則表明尿素酶活性不低于0.04U/mL、不高于0.5U/mL。在固定時間內，顏色越深則表示尿素酶活性越高。

最優的，測試溶液是1％酚酞乙醇溶液和7g/L尿素溶液按照1∶100的體積比制得的混合溶液，體積為10mL。

有益效果：本發明無需對唾液進行處理，只需將采集的適量唾液加入到測試溶液中，利用唾液中尿素酶與尿素的反應產物引發測試溶液顏色變化，便可實現目視法直觀地半定量唾液中尿素酶的活性。相比于常規方式，本方法無需預處理過程、操作簡便、便于攜帶運輸且成本較低，具有較高的便捷應用性能。

具體實施方式

結合實施例對本發明做進一步說明，但不以任何方式對本發明加以限制，基于本發明教導所做出的任何變更或改進，均屬于本發明的保護范圍。

實施例一

采集來源于不同性別、年齡的健康人群的唾液樣本，采集當日完成測試。結果表明，5min時，所有溶液均未發生顯色，即所有唾液樣本的尿素酶活性均低于0.8U/mL；放置17h時，僅3份溶液呈現肉眼可見的紫紅色，與尿素酶活性為0.064U/mL時現象一致，說明僅三份唾液樣品中尿素酶活性接近0.064U/mL，其余唾液樣本中尿素酶活性均低于0.064U/mL。