[發(fā)明專利]一種非洲豬瘟病毒的可視化LAMP檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910511586.0
• 申請日: 2019-06-13
• 公開（公告）號: CN110305984A
• 公開（公告）日: 2019-10-08
• 發(fā)明（設計）人: 劉永生;張杰;李洪波;劉志杰;楊吉飛;林密;張永光;殷宏;丁耀忠;汪洋;馬炳;代軍飛
• 申請（專利權）人: 中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 席勇

本發(fā)明公開一種非洲豬瘟病毒的可視化LAMP檢測試劑盒。該試劑盒包含有6條LAMP引物的LAMP反應液構成的檢測體系。本發(fā)明的試劑盒以中性紅染料替代了傳統(tǒng)鈣黃素，不僅使可視化直觀效果更加鮮明，將反應時間縮短至45分鐘，而且還實現(xiàn)了由試劑盒直接提供反應預混緩沖液的需求，這樣進一步簡化了操作程序，更加有效避免污染發(fā)生。應用本發(fā)明的試劑盒進行檢測，能夠肉眼直接直觀判斷，具有良好的特異性、敏感性和穩(wěn)定性。

技術領域

本發(fā)明涉及一種可視化LAMP試劑盒，具體地說是一種非洲豬瘟病毒的可視 化LAMP檢測試劑盒。

背景技術

非洲豬瘟(英文名稱：African Swine fever，簡稱：ASF)是由非洲豬瘟 病毒(英文名稱：African Swine fever virus，簡稱：ASFV)感染家豬和各種 野豬(如非洲野豬、歐洲野豬等)引起一種急性、出血性、烈性傳染病。世界 動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定報告動物疫病，該病也是我國重點防范的一 類動物疫情。其特征是發(fā)病過程短，最急性和急性感染死亡率高達100％，臨床 表現(xiàn)為發(fā)熱(達40～42℃)，心跳加快，呼吸困難，部分咳嗽，眼、鼻有漿液性 或粘液性膿性分泌物，皮膚發(fā)紺，淋巴結、腎、胃腸粘膜明顯出血，非洲豬瘟臨床癥狀與豬瘟癥狀相似，只能依靠實驗室監(jiān)測確診。

傳統(tǒng)的實時熒光qPCR檢測試劑盒不僅需要昂貴的實時熒光定量PCR儀器， 而且需要依賴儀器的Ct值或者溶解曲線方能夠做出結果判斷，需要嚴格培訓的 專業(yè)技術人員方可以掌握此復雜的操作過程，不利于在基礎實驗室或者養(yǎng)殖場、 屠宰場等現(xiàn)場使用。其它的一些等溫擴增方法，例如重組酶聚合酶擴增(RAA) 法等盡管設備相對簡單化一些，但是還都無法實現(xiàn)可視化檢測，仍依賴專業(yè)技 術人員操作和對結果的分析判斷。由于非洲豬瘟疫情緊急，傳播渠道眾多，更 多是發(fā)生在散養(yǎng)戶或者小規(guī)模豬場(我國規(guī)劃化養(yǎng)豬場占比盡在15％左右)，這 些場所條件簡陋，不具備高要求的設備和專業(yè)化的技術人員，再有非洲豬瘟現(xiàn) 在沒有商品化疫苗，所以，早期現(xiàn)場診斷對疫情的防控突顯十分重要。抗原和 抗體等免疫學監(jiān)測方法在疫病檢測時間上都相對滯后，敏感度也相對核酸檢測 低。非洲豬瘟病毒核酸在感染24小時就可以檢測出來，故此，開發(fā)能夠滿足現(xiàn) 場病毒核酸檢測需求的方法是及時發(fā)現(xiàn)疫情的最有效手段。本發(fā)明的非洲豬瘟 病毒可視化LAMP檢測試劑盒完全能夠滿足現(xiàn)場檢測，尤其是設備相對簡陋的小 型豬場或者屠宰場等基礎單位的迫切需求。

發(fā)明內容

本發(fā)明的的目的在于提出一種非洲豬瘟病毒的可視化LAMP檢測試劑盒，以 解決上述所述的缺點。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所述一種檢測非洲豬瘟病毒的LAMP引物組，所述 引物組為以下六條引物：

ASFV-LP-F3-3：5'-CTAAATACTATCAGCCCCCTCTTG-3'，

ASFV-LP-FIP-3：

5'-ATTGCGTCTACTGGGGCGTCCAGTTTTGGCGAGCGCTTTATCACCATA-3'，

ASFV-LP-FLOOP-3：5'-CACCAAATCCTTTTGCGATGC-3'，

ASFV-LP-BIP-3：

5'-CGCTTTAAACCATGGTTTATCCCAGTTTTTCAGGGGTTACAAACAGGTTATTGA-3'，

ASFV-LP-BLOOP-3：5'-GAAATCTCGCTCACGAATAATG-3'，

ASFV-LP-B3-3：5'-GGGTCACCTGCGTTTTATGGA-3'。

本發(fā)明所述一種檢測非洲豬瘟病毒的LAMP試劑盒，所述試劑盒包括上述引 物組。

所述試劑盒主要由非洲豬瘟病毒可視化LAMP檢測試劑盒組成；