[發(fā)明專利]一種用于增強(qiáng)免疫印跡檢測信號的抗體稀釋液

在審

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• 申請日: 2019-06-13
• 公開（公告）號: CN110297085A
• 公開（公告）日: 2019-10-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏一方;陳莉;胡方影;胡良波;樂楊靜
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢博士德生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11212
• 代理人: 趙秀斌

本發(fā)明涉及一種用于增強(qiáng)免疫印跡檢測信號的抗體稀釋液，每1L抗體稀釋液包括：聚乙烯醇0.25～2.5g，聚乙烯吡絡(luò)烷酮0.25～2.5g，表面活性劑0.1～2g，卡松防腐劑0.015～0.75mL，余量為0.01～0.1moL/L的TBS緩沖液，所述TBS緩沖液的pH為7.2～7.6。本發(fā)明的用于增強(qiáng)免疫印跡檢測信號的抗體稀釋液可以用于免疫印跡檢測的抗體稀釋，避免蛋白質(zhì)引起的污染產(chǎn)生的較高背景，顯示出較強(qiáng)的信噪比，同時(shí)增強(qiáng)免疫印跡信號強(qiáng)度和靈敏度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫印跡檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于增強(qiáng)免疫印跡檢測信號的抗體稀釋液。

背景技術(shù)

免疫印跡檢測時(shí)分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)等生命科學(xué)研究中常用的一種試驗(yàn)方法，其原理是通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳區(qū)分待測樣品不同組分，再在電流的作用下，使蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移至印跡膜上，通過特異性抗體作為探針，對靶抗原蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測，通過分析特異性反應(yīng)的位置和強(qiáng)度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞和/或組織中的表達(dá)情況的信息，免疫印跡檢測過程中可以應(yīng)用DAB顯色，ECL化學(xué)發(fā)光底物顯色，熒光標(biāo)記的二抗直接顯色等，該技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)表達(dá)水平的檢測中。

抗體稀釋液是在免疫印跡檢測時(shí)用于一抗和二抗的稀釋和配制。

現(xiàn)有的免疫印跡檢測時(shí)用的抗體稀釋液通常由牛血清蛋白(BSA)、脫脂牛奶、酪蛋白、動物明膠等蛋白質(zhì)配制而成，易導(dǎo)致抗原或抗體的交叉污染，產(chǎn)生的背景較高，信噪比比較低，且無信號增強(qiáng)作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為解決以上技術(shù)問題提供了一種信噪比低、能夠增強(qiáng)免疫印跡的信號強(qiáng)度和靈敏度的抗體稀釋液。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：一種用于增強(qiáng)免疫印跡檢測信號的抗體稀釋液，每1L稀釋液包括：聚乙烯醇0.25～2.5g，聚乙烯吡絡(luò)烷酮0.25～2.5g，表面活性劑0.1～2g，卡松防腐劑0.015～0.75mL，余量為0.01～0.1moL/L的TBS緩沖液，所述TBS緩沖液的pH為7.2～7.6。

進(jìn)一步，所述表面活性劑為烷基糖苷。

進(jìn)一步，每1L抗體稀釋液包括：聚乙烯醇1g，聚乙烯吡絡(luò)烷酮0.5g，烷基糖苷1g，卡松防腐劑0.15mL，余量為0.02moL/L的TBS緩沖液，所述TBS緩沖液的pH為7.2～7.6。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的用于增強(qiáng)免疫印跡檢測信號的抗體稀釋液能夠用于免疫印跡檢測中一抗和二抗的孵育，待檢測蛋白質(zhì)結(jié)合在硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯膜等固相支持物上，其中聚乙烯醇和聚乙烯吡絡(luò)烷酮能夠增強(qiáng)抗體和膜上的蛋白質(zhì)的結(jié)合，從而增強(qiáng)免疫印跡檢測的信號的強(qiáng)度和靈敏度，同時(shí)該抗體稀釋液中并不存在常規(guī)蛋白質(zhì)成分(如牛血清蛋白、脫脂牛奶、酪蛋白等)，可以有效避免外源蛋白引起的抗原抗體的非特異性結(jié)合，降低背景，顯示出較強(qiáng)的信噪比。

附圖說明

圖1為本發(fā)明免疫印跡檢測的成像圖；

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。

實(shí)施例1

配制1L濃度為0.02mol/L的pH為7.2～7.6的TBS緩沖液，具體配制方法如下：稱取Tris 2.42g、NaCl 5.84g溶于800mL蒸餾水中，用HCl將pH調(diào)至7.2～7.6，然后加蒸餾水定容至1L。

取800mL配制好的TBS緩沖液，加入1g聚乙烯醇、0.5g聚乙烯吡絡(luò)烷酮和1g烷基糖苷，攪拌均勻，量取1mL濃度為15％的卡松溶液，加入800mLTBS緩沖液中，然后用TBS緩沖液定容至1L。

實(shí)施例2