[發(fā)明專利]一種倏逝波核酸適配體傳感器及應(yīng)用其進(jìn)行小分子檢測的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910509959.0
• 申請日: 2019-06-13
• 公開（公告）號: CN112083159B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 婁新徽;陸張偉
• 申請（專利權(quán)）人: 首都師范大學(xué)
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533
• 代理公司: 北京展翅星辰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11693
• 代理人: 王文生

1.一種倏逝波核酸適配體傳感器，其特征在于，其為具有靶標(biāo)自富集和純化能力的核酸適配體倏逝波光纖生物傳感器，所述靶標(biāo)為DEHP、SDM或者Kana，將SPME與核酸適配體傳感器相結(jié)合，具有高效靶標(biāo)萃取能力的萃取劑和靶標(biāo)特異的核酸適配體共同組裝在光纖傳感界面上，所述萃取劑為吐溫80。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的倏逝波核酸適配體傳感器，其特征在于，所述靶標(biāo)特異的核酸適配體為

NH₂-(EG)₁₈-CTTTCTGTCCTTCCGTCACATCCCACGCATTCTCCACAT，或者

NH₂-(EG)₁₈-GAGGGCAACGAGTGTTTATAGA，或者

NH₂-(EG)₁₈-TGGGGGTTGAGGCTAAGCCGAGTCACTAT，所述靶標(biāo)特異的核酸適配體偶聯(lián)在光纖表面。

3.一種進(jìn)行小分子檢測的方法，其特征在于，其基于小分子靶標(biāo)和與核酸適配體互補(bǔ)短鏈DNA與偶聯(lián)在光纖表面的核酸適配體競爭性結(jié)合，實(shí)現(xiàn)對小分子靶標(biāo)的定量檢測，所述小分子為DEHP、SDM或者Kana，將SPME與核酸適配體傳感器相結(jié)合，具有高效靶標(biāo)萃取能力的萃取劑和靶標(biāo)特異的核酸適配體共同組裝在光纖傳感界面上，所述萃取劑為吐溫80。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，光纖表面的吐溫80把溶液中的小分子高效富集到光纖表面附近，促進(jìn)偶聯(lián)在光纖表面的核酸適配體和小分子之間的結(jié)合。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：步驟1)光纖表面的羥基化；步驟2)光纖表面的硅烷化；步驟3)光纖表面的偶聯(lián)及固定DNA；以及步驟4)光纖表面的還原及封閉。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟1)光纖表面的羥基化如下：首先將表面處理干凈的光纖浸泡在體積比為3:1的濃硫酸：30％過氧化氫混合溶液中，100-120℃下1h，然后將光纖從混合溶液中取出，用超純水洗到中性，N₂吹干，70-90℃下處理4-6h，取出后干燥器中冷卻。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟2)光纖表面的硅烷化如下：將上述光纖放入有一定濃度的3-氨丙基三乙氧基硅烷的無水甲苯溶液，室溫反應(yīng)1-2h，取出后分別用無水甲苯，v/v＝1:1的甲苯-乙醇,乙醇沖洗三遍，N₂吹干，在180℃下處理1h，取出后于干燥器中冷卻。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，步驟3)光纖表面的偶聯(lián)及固定DNA如下：將硅烷化后的光纖放入含一定濃度戊二醛的10mM磷酸鹽緩沖溶液中，37℃反應(yīng)60分鐘，反應(yīng)結(jié)束后用10mM磷酸鹽緩沖溶液清洗三次，N₂吹干，將戊二醛偶聯(lián)后的光纖放入一定濃度氨基修飾的靶標(biāo)的核酸適配體，室溫反應(yīng)6-8h，隨后用10mM磷酸鹽緩沖溶液清洗三次，N₂吹干，放入干燥器中保存。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，步驟4)光纖表面的還原及封閉如下：將光纖放入一定濃度的NaBH₄溶液還原30min，并用一定濃度的吐溫80溶液封閉光纖界面，隨后用10mM磷酸鹽緩沖溶液清洗三次，N₂吹干，放入干燥器中保存。