[發(fā)明專利]融合三肽囊素的克隆表達及應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910507933.2 | 申請日： | 2019-06-12 |
| 公開（公告）號： | CN110218258A | 公開（公告）日： | 2019-09-10 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 吳曉平;余深翼;曾宇坤;趙金榮;盧榮彬;安亞娟;關(guān)文超;龔祖新;周東輝;吳異健 | 申請（專利權(quán)）人： | 福建農(nóng)林大學(xué) |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;A61K39/39;A61P37/04 |
| 代理公司： | 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100 | 代理人： | 饒文君;蔡學(xué)俊 |
| 地址： | 350002 福*** | 國省代碼： | 福建;35 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 三肽囊素 克隆 生長促進作用 免疫增強 免疫佐劑 市場應(yīng)用 融合 反轉(zhuǎn)錄 體內(nèi) 病毒 感染 應(yīng)用 | ||
本發(fā)明設(shè)計并克隆表達了一種可溶性融合三肽囊素，經(jīng)過純化后作為動物的免疫佐劑，在具有ALV感染背景的雞群中體現(xiàn)了良好的免疫增強作用、生長促進作用，并在體內(nèi)外顯示出較強的抑制反轉(zhuǎn)錄病毒的作用，具有良好的市場應(yīng)用前景。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及融合三肽囊素的克隆表達及應(yīng)用。
背景技術(shù)
三肽囊素（bursin, BS），又稱囊素肽、法氏囊活性肽，是存在于禽法氏囊中的小分子肽類活性物質(zhì)。其結(jié)構(gòu)為賴氨酸-組氨酸-甘氨酸（Lys-His-Gly-NH2）。國內(nèi)外研究結(jié)果表明，BS具有增強免疫和促進畜禽生長的功能。BS能夠提高血清中第二信使cGMP的含量，增加cGMP 和cAMP 的比值，提高B細胞中DNA轉(zhuǎn)錄成mRNA的速度，促進B細胞內(nèi)蛋白的合成，從而提高血清中特異性抗體的水平。
近年來，禽白血病（Avian Leukosis，AL）的流行范圍在逐漸擴大，造成巨大的經(jīng)濟損失。AL是由禽白血病病毒（
ALV感染禽類會導(dǎo)致機體的免疫抑制。目前，ALV在養(yǎng)殖業(yè)中廣泛存在和流行，范圍逐步擴大。對于AL目前還未研制出安全有效的生物制品（如：疫苗）來預(yù)防，主要原因是找不到非致病性的ALV毒株，這給獸醫(yī)工作者帶來了嚴峻的挑戰(zhàn)，同時造成養(yǎng)殖業(yè)的巨大損失。
發(fā)明內(nèi)容
本研究根據(jù)大腸桿菌編碼外源蛋白的特異性，設(shè)計合成串聯(lián)4肽BS，并連接融合肽編碼序列，構(gòu)建重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BL21（DE3）大腸桿菌進行原核表達，并探索和優(yōu)化可溶性表達條件。設(shè)計動物實驗研究BS可溶性蛋白和包涵體生長免疫調(diào)節(jié)功能并檢測其安全性，進一步地，本發(fā)明通過雞胚卵黃囊接種重組 ALV-FJ15HT0 建立 ALV 先天感染雞群模型，在進行疫苗接種時注射原核表達的融合BS，探究融合BS 對 ALV 引發(fā)的生長抑制和免疫抑制作用的影響，為融合BS的臨床應(yīng)用提供科學(xué)的依據(jù)。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
一種融合三肽囊素，由串聯(lián)四肽BS(8)和融合肽組成，所述串聯(lián)四肽BS(8)的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示（其氨基酸序列為：GSPRMKNPYKNPYKNPYKNPYKNPYKNPYKNPYKNPY），所述融合肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示（其氨基酸序列為：HMGGGGSKLQRLMEDICLPRWGCLWEDDF）。
所述串聯(lián)四肽BS(8)的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示（其核苷酸序列為：ATGAAAAACC CGTAT AAAAA CCCGT ATAAA AACCC GTATA AAAAC CCGTA TAAAA ACCCG TATAA AAACCCGTAT AAAAA CCCGT ATAAA AACCC GTAT），所述融合肽的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示（其核苷酸序列為：
一種重組表達載體pET-BS，以pET-32a 為質(zhì)粒骨架，設(shè)計合成串聯(lián)四肽BS(8)和融合肽的核苷酸序列，構(gòu)建在質(zhì)粒骨架上，得到重組表達載體pET-BS。
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