[發(fā)明專利]檢測轉(zhuǎn)基因水稻科豐6號的DNA標(biāo)準(zhǔn)品及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910506918.6
• 申請日: 2019-06-12
• 公開（公告）號: CN110257542B
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 付偉;朱鵬宇;王晨光;朱水芳
• 申請（專利權(quán)）人: 中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京君慧知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11716
• 代理人: 吳紹群

本發(fā)明提供了一種檢測轉(zhuǎn)基因成分的DNA標(biāo)準(zhǔn)品，所述DNA標(biāo)準(zhǔn)品包括科豐6號轉(zhuǎn)化體特異性序列Kefeng6的基因片段、水稻內(nèi)源基因SPS的基因片段和水稻內(nèi)源基因PLD的基因片段，所述Kefeng6的基因片段的序列如SEQ ID No.1第1?155位所示，所述SPS的基因片段的序列如SEQ ID No.1第178?258位所示，所述PLD的基因片段的序列如SEQ ID No.1第259?326位所示。本發(fā)明所提供的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒分子質(zhì)量好，純度符合要求，能夠滿足大批量制備，均勻性好，穩(wěn)定性強(qiáng)，可以檢測出靶標(biāo)片段，為水稻的轉(zhuǎn)基因成分鑒定工作提供了通用的陽性對照樣品以及參考。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)基因技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測轉(zhuǎn)基因水稻品系科豐6號的DNA標(biāo)準(zhǔn)品及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品是具有一種或多種足夠均勻和很好確定的特性值，在轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測中用以校準(zhǔn)測量裝置、評價測量方法或給材料賦值的一種材料或物質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)樣品在保證測試結(jié)果的可比性和溯源性、保障食品安全、解決貿(mào)易爭端、促進(jìn)經(jīng)濟(jì)發(fā)展等方面均具有重要的意義。

轉(zhuǎn)基因水稻，是指通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將不同品種水稻或近緣物種的抗蟲基因、抗病基因等導(dǎo)入某種水稻基因組內(nèi)培育出的水稻品種。科豐6號是中國自主研發(fā)的雙價抗蟲轉(zhuǎn)基因水稻，其抗蟲基因?yàn)樘K云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)殺蟲晶體蛋白Cry1Ac基因和豇豆胰蛋白酶抑制劑基因SCK基因，目前已通過生產(chǎn)性試驗(yàn)，正在申請生產(chǎn)應(yīng)用安全證書，具有良好的商業(yè)化前景。

目前尚未有針對Cry1Ac/SCK雙價抗蟲轉(zhuǎn)基因水稻科豐6號進(jìn)行檢測的質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)品的相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，一方面，本發(fā)明提供了一種檢測轉(zhuǎn)基因成分的DNA標(biāo)準(zhǔn)品，所述DNA標(biāo)準(zhǔn)品包括科豐6號轉(zhuǎn)化體特異性序列Kefeng6的基因片段、水稻內(nèi)源基因SPS的基因片段和水稻內(nèi)源基因PLD的基因片段。

其中，所述Kefeng6的基因片段的序列如SEQ ID No.1第1-155位所示，所述SPS的基因片段的序列如SEQ ID No.1第178-258位所示，所述PLD的基因片段的序列如SEQ IDNo.1第259-326位所示。

進(jìn)一步地，所述DNA標(biāo)準(zhǔn)品包括依次連接的Kefeng6的基因片段、SPS的基因片段和PLD的基因片段；優(yōu)選的，所述DNA標(biāo)準(zhǔn)品還包括用于連接Kefeng6的基因片段、SPS的基因片段和PLD的基因片段的間隔序列。

更進(jìn)一步地，所述DNA標(biāo)準(zhǔn)品包含SEQ ID No.1所示的序列。

另一方面，本發(fā)明還提供了包含上述DNA標(biāo)準(zhǔn)品的重組載體；優(yōu)選的，所述骨架載體選自pUC18、pUC19、pUC57中的一種或多種，更優(yōu)選，pUC57，更優(yōu)選，將所述DNA標(biāo)準(zhǔn)品連接于pUC57平端酶EcoRV的酶切位點(diǎn)處。

另一方面，本發(fā)明還提供了上述DNA標(biāo)準(zhǔn)品或權(quán)利要求4所述的重組載體在檢測轉(zhuǎn)基因成分中的應(yīng)用；優(yōu)選的，所述轉(zhuǎn)基因成分來源于轉(zhuǎn)基因植物和/或其加工品；更優(yōu)選的，所述轉(zhuǎn)基因植物為轉(zhuǎn)基因水稻；更優(yōu)選的，所述轉(zhuǎn)基因水稻為轉(zhuǎn)基因水稻科豐6號。

另一方面，本發(fā)明還提供了一種檢測轉(zhuǎn)基因成分的PCR試劑盒，所述試劑盒包括上述DNA標(biāo)準(zhǔn)品或重組載體。

進(jìn)一步地，所述試劑盒還包括引物對，所述引物對包括SEQ ID No.2和SEQ IDNo.3所示的引物對、SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的引物對、SEQ ID No.8和SEQ IDNo.9所示的引物對。

進(jìn)一步地，所述試劑盒還包括探針，所述探針包含SEQ ID No.4所示的探針、SEQID No.7所示的探針和SEQ ID No.10所示的探針。