[發明專利]單核細胞增生李斯特菌和伊氏李斯特菌多重PCR檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201910502760.5
• 申請日: 2019-06-11
• 公開（公告）號: CN110184367B
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: 焦新安;殷月蘭;馮有為;孟凡增;陳思思;潘志明;陳祥;王晶
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

1.一種單核細胞增生李斯特菌和伊氏李斯特菌的多重PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述多重PCR檢測試劑盒中包括基因lmo0601檢測引物以及基因smcl檢測引物，所述基因lmo0601檢測引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO .1所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ IDNO .2所示的反向引物；所述基因smcl檢測引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO .3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO .4所示的反向引物。

2.根據權利要求1所述的多重PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述多重PCR檢測試劑盒中包括ddH₂O、dNTP、PCR buffer、rTaq酶、樣品基因組DNA提取試劑中的一種或多種。

3.根據權利要求1所述的多重PCR檢測試劑盒，其特征在于：所述多重PCR檢測試劑盒還含有陽性對照和/或陰性對照。

4.如權要求1~3任意一項所述的單核細胞增生李斯特菌和伊氏李斯特菌的多重PCR檢測試劑盒非疾病診斷目的的檢測方法，所述方法包括以下步驟：

(1)提取樣品基因組DNA；

(2)加樣：將樣品基因組DNA、陽性對照和/或陰性對照分別加入裝有PCR反應體系的PCR管中，獲得對應的樣品反應管、陽性反應管和/或陰性反應管，所述PCR反應體系中含有前述基因lmo0601以及基因smcl檢測引物；

(3)PCR反應：反應管置于PCR儀上，設置循環參數，進行PCR反應；

(4)PCR反應結束后，分析結果。

5.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于：所述步驟（3）中PCR反應條件為：95℃預變性5 min；95℃變性30 s、55℃退火30 s、72℃延伸1 min，35個循環；72℃終止10 min。

6.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟（4）中結果分析方法具體如下：擴增出220 bp條帶時，判定為單核細胞增生李斯特菌陽性；擴增出889 bp條帶時，判定為伊氏李斯特菌陽性。

7.如權利要求1~3任意一項所述的單核細胞增生李斯特菌和伊氏李斯特菌多重PCR檢測試劑盒在制備基因lmo0601以及基因smcl檢測產品中的用途。