[發明專利]一種信使RNA的提取方法

在審

• 申請號: 201910501468.1
• 申請日: 2019-06-11
• 公開（公告）號: CN110577980A
• 公開（公告）日: 2019-12-17
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 湘潭智聯技術轉移促進有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12N15/85;C12N15/65
• 代理公司: 31253 上海精晟知識產權代理有限公司
• 代理人: 安曼

本發明公開了一種信使RNA的提取方法，其中，所述提取方法將標記核糖體的質粒通過子宮內胚胎電轉染技術轉染至胚胎內，待生長到特定時間進行翻譯核糖體親和純化技術，獲得純化的信使RNA。本發明采用子宮內胚胎點轉染技術和翻譯核糖體親和純化技術相結合，根據大腦皮質不同板層神經元發育的時間特性，在特定時間和腦區上標記特定的神經元，并取發育過程中的不同時間點進行實驗，以期取得發育期動態分子庫構建翻譯譜，為總結規律，發現特定關鍵因子，篩選有效基因打下堅實基礎。

技術領域

本發明涉及一種信使RNA的提取方法，屬于生物技術領域。

背景技術

哺乳動物的大腦新皮層是一種復雜的、具有高度組織性的結構，由6層不同類型的板層(layer)組成，其間由數百種不同類型的神經元細胞和神經膠質細胞。大腦新皮層是負責認知功能、感官知覺和意識的大腦區域，在進化過程中經歷了顯著的擴充和發展。在發育過程中，各板層具有固定的發育順序和時間，并按時間順序產生不同板層的特點神經元。神經元發育是基于中心法則，將遺傳物質通過轉錄和翻譯，最終產生蛋白質，發揮生物學作用，通過其各過程的復雜編排組合，以獲得特定的細胞身份。決定特定神經元發育的最終類型及其所具備的功能作用是由基因組控制的，但由于神經元發育過程中時間及空間方面的復雜性，給這類研究造成了巨大障礙。尋找大腦新皮質中這種多樣性和特異化的神經元的起源，發現形成和維持神經元多樣性的規律，是目前亟待解決的科學問題。

目前對于神經元發育過程的研究大多集中在轉錄層面，通過提取全腦或者全皮質組織中的RNA，進行轉錄譜學分析。盡管通過生物信息學分析可以從轉錄譜中發現一些神經發育過程中的分子變化規律，但是同時其具有一些局限性，其中比較重要的：第一，由于神經元發育的時間性和空間性特點，常規組織樣本提取方法取樣較雜，包含多個區域、皮質板層及細胞類型，無法對特定區域，特定板層，或特定的神經元亞型進行歸類性分析研究；第二，轉錄譜為轉錄水平的研究，研究的是細胞總RNA，里面既含有可以在翻譯時編碼蛋白質的外顯子(exon)，也含有非編碼性的內含子(Intron)，由于存在轉錄后修飾，翻譯及翻譯后修飾等一系列生物反應，因此其對最終發揮生物學效應的蛋白質變化規律并不能很好地反應。而解決這一挑戰需要高質量的神經元亞類純化方法，并考慮神經元動態、多層的特點，在轉錄翻譯期間采集神經元并進行整合分析。同時也需從相同組織獲得多種神經元亞型的組合譜以更好地理解形成復雜網狀聯系的調節通路。目前，已經通過各種遺傳學及手術的方式來嘗試解釋新皮質的復雜性和不同表征神經元細胞類型的問題，然而標記和純化并定義神經元亞型仍然具有挑戰性，因為在皮質發育過程中，特異性標記物總是動態變化的。因此，急需一種準確提取神經元樣本的方法，便于對神經元發育進行精準的檢測與研究。

發明內容

針對現有技術存在的上述問題，本發明的目的是以熒光質粒標記的核糖體為基礎，收集與標記核糖體結合的信使RNA，獲得一種提取正在進行翻譯的信使RNA的信使RNA的提取方法。

為實現上述發明目的之一，本發明采用的信使RNA的提取方法的技術方案如下：

本發明的提取方法通過將標記核糖體的質粒通過子宮內胚胎電轉染技術(IUE)轉染至小鼠胚胎內，在小鼠生長到特定時間進行翻譯核糖體親和純化技術(TRAP)，獲得純化的信使RNA(mRNA)。

本發明采用將子宮內胚胎電轉染技術和翻譯核糖體親和純化技術相結合的方式，可以對特定對象在特定時間的胞內核糖體進行提取和檢測，本發明以神經發育的研究作為目的，以特定神經層中的mRNA作為提取對象進行提取，小鼠僅為常規實驗客體，但本發明的方法不應限于對小鼠神經細胞中mRNA的提取。