[發明專利]靶向人源化CEA的嵌合抗原受體及其用途

在審

• 申請號: 201910501250.6
• 申請日: 2019-06-11
• 公開（公告）號: CN112063640A
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發明（設計）人: 王恩秀;汪晨;張海
• 申請（專利權）人: 南京艾德免疫治療研究院有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C07K19/00;C12N15/867;C12N7/01;A61K39/00;A61P35/00;A61P35/02;A61P35/04
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 王新生

本發明涉及一種靶向人源化CEA的嵌合抗原受體及其用途。具體而言，本發明提供一種核酸序列，選自：含有依次連接的人DAP12的編碼序列、T2A的編碼序列、人源化CEA單鏈抗體的編碼序列、人TREM1跨膜和胞內區的編碼序列。本發明還提供相關的融合蛋白、含所述編碼序列的載體，以及所述融合蛋白、編碼序列、載體的用途。

技術領域

本發明屬于嵌合抗原受體領域，具體涉及靶向CEA的嵌合抗原受體及其用途。

背景技術

CEA最早從胎兒結腸癌組織中發現，是胚胎性致癌抗原，故名為“癌胚抗原”。CEA的編碼基因位于19號染色體，其表達產物是相對分子質量為150kDa～300kDa的糖蛋白。研究表明CEA的組分并不單一，而是一種富含多糖的蛋白復合物，其含量45％為蛋白質，含有巖藻糖、甘露糖、半乳糖以及唾液酸等。胎兒早期的消化管及某些組織均含有合成CEA的能力，但孕六個月以后CEA含量逐漸減少，出生后含量極低，但在某些惡性腫瘤患者的血清中可發現其含量有異常升高。因為由細胞分泌產生的CEA進入局部體液及血液中，所以在直、結腸癌、肝癌、腎癌、乳腺癌、食管癌等腫瘤患者的血清及胸、腹水、消化液內均可能出現CEA含量異常升高的現象，肺癌患者胸水的CEA含量往往高于血清中含量。CEA輕度增加也見于某些良性消化道疾病如腸梗阻、膽道梗阻、胰腺炎、肝硬化、結腸息肉、潰瘍性結腸炎以及吸煙者和老年人。CEA是一種常見的腫瘤相關抗原和國際上公認的腫瘤標志物，它在大多數人體內胚層來源的腫瘤中都有表達。癌胚抗原(CEA)主要存在于直、結腸癌組織，也存在于肝癌、胰腺癌、腎癌、乳腺癌、食管癌、卵巢癌等腫瘤組織中，在正常結腸組織中也有少量CEA存在。胎兒腸粘膜內，結腸癌、胃癌、肺癌、膽管癌等均可見CEA指標明顯升高。

隨著腫瘤免疫學理論和臨床技術的發展，嵌合抗原受體T細胞療法(Chimericantigen receptor T-cell immunotherapy，CAR-T)成為目前最有發展前景的腫瘤免疫療法之一[Schmitz M，et al.Chimeric antigen receptor-engineered T cellsforimmunotherapy of Cancer.J Biomed Biotechnol，2010，doi：10.1155/2010/956304.]。嵌合抗原受體(CAR)是CAR-T的核心部件，CAR能針對所選擇的免疫細胞重定向其特異性和反應性，因此賦予T細胞HLA非依賴的方式識別腫瘤抗原的能力，這使得經過CAR改造的T細胞相較與正常T細胞受體(TCR)應答不同，不受MHC限制，具有活化和增殖的能力，因此具有高效的殺傷腫瘤細胞的能力。

嵌合抗原受體(CAR)在T細胞上表達合成蛋白，其將抗體的抗原識別片段(如抗體單鏈可變區片段)與胞內信號結構域融合。研究發現，以腫瘤特異性單克隆抗體的單鏈可變區(scFv)取代TCR的α，β鏈可變區，并將scFv直接和T細胞信號傳導結構域連接，形成嵌合抗原受體(CAR)表達于T細胞表面，可通過scFv識別腫瘤特異性抗原，直接產生T細胞的活化信號，促進T細胞活化、增殖，特異性殺傷腫瘤細胞。該過程主要依賴CAR-T細胞表面的scFv對腫瘤抗原的特異性識別，免疫反應的特異性和殺傷性較強。

本發明對構建的靶向CEA的新型CAR，本發明采用的是人源化CEA(huM5A)單鏈抗體，huM5A具有高親和力。huM5A是靶向CEA的人源化形式的單克隆抗體，對腫瘤具有治療和診斷作用。本發明對CAR-T細胞進行了修飾，針對CEA靶點發揮CAR-T細胞抗腫瘤作用。本發明為臨床實驗和臨床治療奠定良好的基礎。

隨著CAR-T細胞治療經驗的積累和不斷完善，其在惡性腫瘤中的應用越來越受到各界關注。在此環境下，我們要加快步伐，利用自身已有的工作基礎、研發團隊、醫療團隊申請開展臨床試驗，推動CAR-T細胞治療在治療惡性腫瘤的道路上快速前進。

發明內容

本發明第一方面提供一種核酸序列，所述核酸序列選自：