[發(fā)明專利]一種TGEV、PEDV、SADS-CoV和PDCoV的多重RT-PCR檢測引物組

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910496100.0
• 申請日: 2019-06-10
• 公開（公告）號: CN110257557B
• 公開（公告）日: 2023-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 賀東生;李錦輝;李根
• 申請（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣東廣信君達律師事務(wù)所 44329
• 代理人: 楊曉松

本發(fā)明涉及生物技術(shù)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種TGEV、PEDV、SADS?CoV和PDCoV的多重RT?PCR檢測引物組。所述的TGEV、PEDV、SADS?CoV和PDCoV的多重RT?PCR檢測引物組的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～8所示，本發(fā)明還提供了一種包含上述引物組的試劑盒，該引物組和試劑盒采用一次性PCR反應(yīng)，可快速區(qū)分鑒定TGEV、PEDV、SADS?CoV和PDCoV，特異性好，靈敏度高，重復(fù)性與穩(wěn)定性好，適用于TGEV、PEDV、SADS?CoV和PDCoV的鑒別診斷，該多重PCR試劑盒非常適用于疫病病原確診、病原凈化檢測和流行病學調(diào)查，例如：實驗室、出入境現(xiàn)場、養(yǎng)殖場等。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種TGEV、PEDV、SADS-CoV和PDCoV的多重RT-PCR檢測引物組。

背景技術(shù)

豬腹瀉性疾病是造成散養(yǎng)或規(guī)?；i場經(jīng)濟損失的一個主要因素，特別是導(dǎo)致哺乳仔豬死亡和發(fā)育不良的重要原因。豬腹瀉性疾病自發(fā)生起一直是困擾著全世界養(yǎng)殖業(yè)的難題之一。近年來，隨著飼養(yǎng)方式向更加規(guī)?；图s化飼養(yǎng)方式的轉(zhuǎn)變，豬腹瀉病的病因也變得越來越復(fù)雜。在所有引起豬群腹瀉的因素中，病毒性腹瀉是最主要且最嚴重的因素，病毒性腹瀉病原對仔豬的危害最大。仔豬病毒性腹瀉相關(guān)的病原主要以冠狀病毒為主，主要包括TGEV、PEDV、PDCoV和SADS-CoV。由于這這些病原在臨床癥狀上的相似性，而且都屬于冠狀病毒，因此難以從感染豬的臨床特征和病原的形態(tài)上加以區(qū)分。

豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)和豬傳染性胃腸炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus，TGEV)是兩種傳統(tǒng)的腹瀉病原體。PEDV和TGEV同為不分節(jié)段的單股正鏈RNA病毒，且兩者均屬于尼多病毒目(Nidovirales)、冠狀病毒科(Coronaviridae)、α-冠狀病毒屬(Coronavirus)。PEDV和TGEV均可引起發(fā)病豬只的嚴重腹瀉性疾病，臨床癥狀主要以急性和嚴重水樣腹瀉，嘔吐和脫水為主要特征，但PEDV對斷奶前(3～4周齡)仔豬的影響明顯大于TGEV。此外，在養(yǎng)殖條件較差的情況下，PEDV和TGEV通常呈現(xiàn)混合感染的趨勢，存在協(xié)同致病的可能。豬流行性腹瀉病毒(PEDV)和豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)不僅在中國、韓國、日本、泰國和越南等亞洲國家被廣泛報道，甚至在德國、美國等歐美國家也出現(xiàn)流行。PEDV和TGEV儼然已經(jīng)成為影響全球養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)的重要病原體。

豬德爾塔冠狀病毒(又名豬丁型冠狀病毒，Porcine Deltacoronavirus，PDCoV)和豬急性腹瀉綜合癥冠狀病毒(swine acute diarrhoea syndrome coronavirus，SADS-CoV)是近年來新發(fā)現(xiàn)的兩種冠狀病毒。PDCoV和SADS-CoV的基因組同為單股正鏈不分節(jié)段的RNA。PDCoV屬于尼多病毒目(Nidovirales)、冠狀病毒科(Coronaviridae)、δ-冠狀病毒屬(Coronavirus)；SADS-CoV屬于尼多病毒目(Nidovirales)、冠狀病毒科(Coronaviridae)、α-冠狀病毒屬(Coronavirus)。PDCoV和SADS-CoV所引起的的臨床癥狀類似于其他已知的豬腸道冠狀病毒引起的臨診癥狀，包括嚴重且急性的嘔吐和腹瀉，新生仔豬體重迅速減輕導(dǎo)致急性死亡。PDCoV于2012年首次在香港被報道，2014年2月美國在腹瀉仔豬和母豬的糞便中首次檢測到PDCoV，隨后該病毒在加拿大、韓國、印度、泰國和中國等國家被發(fā)現(xiàn)，在全球呈蔓延趨勢。SADS-CoV于2018年首次在中國廣東被報道，己造成中國四個農(nóng)場共24693頭小豬死亡，同時在廣東其他地區(qū)的蝙蝠體內(nèi)也檢測到病毒的存在。