[發明專利]雜化囊泡的制備方法及其制備得到的雜化囊泡、藥物和應用

在審

• 申請號: 201910494951.1
• 申請日: 2019-06-10
• 公開（公告）號: CN110151701A
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發明（設計）人: 陳漢;劉玲蓉;秦文娟
• 申請（專利權）人: 廣州世賽生物科技有限公司
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K47/46;A61K45/00
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 李雙艷

本發明提供了一種雜化囊泡的制備方法及其制備得到的雜化囊泡、藥物和應用，涉及生物技術領域。該雜化囊泡的制備方法包括將含有脂質體和細胞來源囊泡的混合體系從核孔膜中反復擠出至脂質體和細胞來源囊泡雜化。該制備方法制備得到的雜化囊泡兼具生物相容性和穩定性，并且粒徑分布均一，同時操作簡單，雜化效率高，并且制備的過程中無雜質殘留。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其是涉及一種雜化囊泡的制備方法及其制備得到的雜化囊泡、藥物和應用。

背景技術

近年來小分子藥物和生物大分子遞送載體的開發和研究受到了廣泛關注。這類遞送載體可保護小分子藥物、生物大分子如蛋白質或核酸的活性，以及避免某些蛋白酶或核酸酶的降解作用。某些遞送載體還具有免疫佐劑的功能，可增強抗原誘發的免疫反應。

各種細胞來源囊泡因其來源于機體而具有非常好的生物相容性，此外，嵌入囊泡膜的功能性蛋白也有利于其在靶向遞送領域的應用，為了將細胞來源囊泡用作遞送載體，常常需要對囊泡膜或內水相進行修飾。

比如，為了克服外泌體有限的膠體穩定性和較短的血漿半衰期，可將親水性聚合物PEG插入外泌體膜以增加其膠體穩定性并延長其血漿半衰期(Kim,M.S.,et al(2018).Nanomedicine：nanotechnology，biology，and medicine，14(1)：195-204.)。此外，特定的膜蛋白可以預先通過親本細胞的遺傳修飾摻入外泌體膜中(Takahashi,Y.,et al(2013).JBiotechnol 165(2)：77-84.)。然而，這些外泌體修飾方法都比較繁瑣且效率較低。

還有一類細胞來源囊泡修飾方法是利用化學或物理方法誘導脂質體與細胞來源囊泡發生膜融合，從而將脂質體特定膜組分或內水相引入細胞來源囊泡膜或內水相。比如有研究利用化合物PEG誘導脂質體與外泌體發生膜融合，從而實現對外泌體膜的修飾(Piffoux,M.,et al.(2018).ACS Nano12(7):6830-6842)。還有研究利用物理方法如凍融誘導膜融合，從而將脂質體特定組分聚乙二醇磷脂插入外泌體膜，構建雜化外泌體(T.Sato,Y.,et al(2016).6：21933)。這類通過誘導脂質體與細胞來源囊泡發生膜融合的方法不僅可用于修飾囊泡膜，還能將脂質體內水相插入囊泡內水相，從而將功能分子載入囊泡膜。這種修飾方法同時實現囊泡膜的修飾和內水相的包載。化學誘導膜融合的方法需要在脂質體和外泌體的混合物中添加化學物質如PEG、Ca2⁺或Cu2⁺等，因此在膜融合誘導完畢需要采取額外的步驟除去(Piffoux,M.,et al.(2018).ACS Nano 12(7):6830-6842)。而凍融法誘導膜融合則常引起雜化囊泡的粒徑變大、分布變寬的缺點(T.Sato,Y.,et al(2016).6：21933)，這不利于雜化囊泡作為遞送載體的體內藥動學特性(Pattni,B.S.,etal.(2015).Chemical Reviews 115(19):10938-10966.)，此外凍融法通常耗時6～8h以上，效率偏低。

綜上現有技術方案的缺點有：(1)化學法誘導脂質體與外泌體膜或其它細胞囊泡融合需要添加外來化學物質如Ca²⁺或聚乙二醇，在誘導融合完成后需要采取額外步驟除去這些化學物質，且耗時較長。(2)凍融法誘導脂質體與外泌體膜或其它細胞囊泡融合的方法存在凍融法耗時較長，達通常達6～8h，且凍融制備的雜化外泌體或雜化細胞囊泡粒徑分布很寬。(3)孵育法將功能分子載入外泌體或其它細胞囊泡耗時長，效率偏低。因此，一種改進的脂質體和細胞來源囊泡雜化的方法是目前需要的。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種雜化囊泡的制備方法，該制備方法具有脂質體和細胞來源囊泡雜化效率高、無雜質殘留和雜化后得到的雜化囊泡粒徑分布均一的優點。