[發(fā)明專利]一種檢測(cè)2;5-二甲基吡嗪的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910492577.1
• 申請(qǐng)日: 2019-06-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110286188A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-09-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張麗杰;徐巖
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88
• 代理公司: 哈爾濱市陽(yáng)光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 彭素琴

本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)2,5?二甲基吡嗪的方法，屬于檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明利用UPLC定量檢測(cè)2,5?DMP，實(shí)現(xiàn)了2,5?DMP高效的生物檢測(cè)。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)mg級(jí)別到g級(jí)別的檢測(cè)范圍，并且樣品處理方法簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)間短，只需10min，可以高效的實(shí)現(xiàn)發(fā)酵樣品中2,5?DMP的檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)2,5-二甲基吡嗪的方法，屬于檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

烷基吡嗪是一類支鏈帶有烷基基團(tuán)的含氮雜環(huán)化合物，作為重要的風(fēng)味物質(zhì)，主要貢獻(xiàn)食品中的堅(jiān)果味，烤肉味和烤面包味。烷基吡嗪具有極低的閾值，發(fā)酵的大豆中四甲基吡嗪 (2,3,5,6-Tetramethylpyrazine,TTMP)的閾值為10ppm，2,5-二甲基吡嗪(2,5-Dimethylpyrazine, 2,5-DMP)在食品中只添加1-2ppm，就可以起到明顯的增香作用。由于閾值低，烷基吡嗪可以顯示出強(qiáng)烈的氣味特性，是我國(guó)GB2760-86規(guī)定允許使用的香精物質(zhì)，在食品工業(yè)中主要用作調(diào)味的食品添加劑和一些香料中間體。

烷基吡嗪除了具有獨(dú)特的風(fēng)味價(jià)值之外，在醫(yī)藥方面也具有重要價(jià)值，可用作藥物或醫(yī)藥中間體。TTMP被發(fā)現(xiàn)可以作為藥物治療一些疾病，例如中風(fēng)、心肌細(xì)胞損傷、膝骨關(guān)節(jié)炎等。另外，TTMP還可以作為其他生物藥物的前體來(lái)源，例如，4-(2,3,5,6-TTMP-1)-4'-去甲表鬼臼是一種具有較強(qiáng)抗腫瘤活性的新型化合物，TTMP-2'O-阿魏酸鈉可以提供神經(jīng)保護(hù)，防止神經(jīng)炎癥和腦損傷。2,5-DMP可以作為抗菌類藥物5-甲基吡嗪-2-羧酸的重要合成原料。

目前檢測(cè)2,5-DMP的方法主要采用GC-MS，即參照已授權(quán)專利：一種測(cè)定白酒中吡嗪類化合物的方法(申請(qǐng)?zhí)枺篊N200710019764.5)。然而，1.一臺(tái)帶有自動(dòng)進(jìn)樣器的GC-MS售價(jià)在百萬(wàn)以上，難以應(yīng)用于普通檢測(cè)機(jī)構(gòu)；2.GC-MS的檢測(cè)幅度過(guò)窄，一般只能檢測(cè)mM級(jí)別的吡嗪化合物。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述至少一個(gè)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種檢測(cè)2,5-二甲基吡嗪(2,5-DMP)的方法，通過(guò)利用UPLC定量檢測(cè)2,5-DMP，實(shí)現(xiàn)了mg級(jí)別到g級(jí)別的檢測(cè)范圍，樣品處理方法簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)間短，只需10min。

本發(fā)明的檢測(cè)2,5-二甲基吡嗪的方法，是利用UPLC進(jìn)行檢測(cè)；所述UPLC進(jìn)行檢測(cè)條件是：

色譜柱為WatersBEHC18；

流動(dòng)相A為0.1％甲酸溶液、流動(dòng)相B為色譜級(jí)甲醇；

流動(dòng)相洗脫梯度：初始，31％B；0-3min，31％-69％B；3-10min，31％B；

運(yùn)行時(shí)間為10min；

流速為0.20ml·min^-1；

紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm。

在一種實(shí)施方式中，UPLC進(jìn)行檢測(cè)的上樣量1μL。

在一種實(shí)施方式中，所述檢測(cè)為定量檢測(cè)或定性檢測(cè)。

在一種實(shí)施方式中，所述定量檢測(cè)，是先配制2,5-DMP標(biāo)準(zhǔn)品，采用所述UPLC進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)2,5-DMP濃度與峰面積的變化擬合得到2,5-DMP標(biāo)準(zhǔn)曲線；然后將待測(cè)樣品采用所述UPLC進(jìn)行檢測(cè)，將待測(cè)樣品的峰面積代入2,5-DMP標(biāo)準(zhǔn)曲線中，即得到待測(cè)樣品中的2,5-DMP濃度。

在一種實(shí)施方式中，所述待測(cè)樣品為2,5-DMP水溶液，或者含有2,5-DMP的發(fā)酵上清液。

在一種實(shí)施方式中，所述發(fā)酵上清液，是將產(chǎn)2,5-DMP的微生物進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)后，將菌液離心獲取的上清液。

在一種實(shí)施方式中，所述發(fā)酵上清液，是將B.subtilis168種子液接種至含有L-蘇氨酸的培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)后獲得的。