[發明專利]一種來源于骨髓間充質干細胞外泌體-阿霉素納米靶向藥物的制備及體外抗骨肉瘤的研究

有效

• 申請號: 201910488672.4
• 申請日: 2019-06-06
• 公開（公告）號: CN110124058B
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 鐘光賢;陳錦元;魏洪翔;吳朝陽;林建華
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學附屬第一醫院
• 主分類號: A61K47/69
• 分類號: A61K47/69;A61K31/704;A61P35/00;C12N5/0775
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

1.一種來源于骨髓間充質干細胞外泌體-阿霉素在制備治療骨肉瘤的納米靶向藥物中的應用，其中，所述來源于骨髓間充質干細胞外泌體-阿霉素是以來源于骨髓間充質干細胞的外泌體作為納米載體裝載化療藥物阿霉素。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述來源于骨髓間充質干細胞的外泌體的制備方法包括如下步驟：

（1）骨髓間充質干細胞的培養：間充質干細胞生長到融合度70%-80%時，更換無血清培養基培養48個小時，接著收集其培養基用于外泌體的提取；（2）外泌體的提取：將收集的培養基于4°C，3000g離心10分鐘，用于清除細胞及細胞碎片；接著將外泌體提取試劑盒中的試劑按體積比為1:4的比例與培養基混合，渦旋震蕩1分鐘后常溫放置2小時，接著將混合液于4°C，10000g離心60分鐘用于分離外泌體，將上清液吸干凈后，每10mL培養基用100uL PBS重懸，然后將重懸液置于外泌體純化柱中于4°C，3000g離心10分鐘獲取最終外泌體。

3.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述來源于骨髓間充質干細胞外泌體-阿霉素的制備方法步驟如下：將鹽酸阿霉素粉末用無菌注射用水稀釋至1mg/mL，接著將70ul1mg/mL的權利要求2制備的外泌體與930ul 1mg/mL鹽酸阿霉素混合，靜置30分鐘后，加三乙胺去鹽，常溫放置60分鐘后將混合液移至透析袋，于4°C過夜，計算其包載量和釋放度。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述包載量和釋放度計算的步驟如下：（1）包載量計算：將制備的來源于骨髓間充質干細胞外泌體-阿霉素置于酶標儀，于490 nm處測量其吸收峰，計算藥物的包載量；（2）藥物體外釋放實驗：將3 mL包載好的來源于骨髓間充質干細胞外泌體-阿霉素藥物置于透析袋，并分別放置于pH7.4 與pH4.5的PBS溶液中，分別于1、 2、 4、 8、12、24 以及 36小時通過酶標儀測定阿霉素的濃度，計算藥物的釋放度。