[發明專利]一種白血病細胞外泌體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201910479812.1
• 申請日: 2019-06-04
• 公開（公告）號: CN110172449A
• 公開（公告）日: 2019-08-27
• 發明（設計）人: 郝思國;胡薇薇;黃方
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬新華醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;A61K39/00;A61P35/02
• 代理公司: 長沙星耀專利事務所(普通合伙) 43205
• 代理人: 舒欣

本發明公開了一種白血病細胞外泌體疫苗及其制備方法和應用，屬于生物醫學領域。該白血病細胞外泌體是由CD80和/或CD86過表達基因修飾的白血病細胞分泌的。進一步地，所述CD80和/或CD86過表達基因修飾是指利用負載CD80基因和/或CD86基因的慢病毒載體轉染白血病細胞。本發明提供的白血病細胞外泌體能夠用于制備抗白血病免疫疫苗，能夠克服LEX低表達共刺激分子而免疫原性低下的缺陷，使其免疫原性得到明顯提高。

技術領域

本發明屬于生物醫學領域，具體地，涉及白血病細胞外泌體疫苗及其制備方法和應用。更具體地，涉及一種經CD80和/或CD86過表達修飾的白血病細胞外泌體及其制備方法和應用。

背景技術

急性白血病是血液系統常見的惡性疾病之一，長期以來依賴于大劑量化療及造血干細胞移植(HSCT)。盡管如此，高復發率仍是白血病等惡性血液病的治療難題。白血病復發的根源主要在于體內殘存的白血病細胞(MRL)，因此，清除MRL是延長患者治療后的長期生存甚至治愈的關鍵。針對白血病細胞抗原的特異性免疫治療近年來取得了驕人的臨床療效，既克服了傳統化療及造血干細胞移植的非靶向性，同時也避免因長期接受傳統放、化療以及HSCT的明顯毒副作用，因而受到廣泛關注。

近年來，基于外泌體(exosomes，EXO)的抗腫瘤免疫治療在動物模型以及臨床研究中均取得了明顯療效。EXO是各種包括免疫細胞、腫瘤細胞、間充質干細胞等真核細胞釋放的直徑大小為30-100nm的多囊泡小體。研究證實，腫瘤細胞包括白血病細胞分泌的外泌體負載有腫瘤細胞特異性的抗原，因此可作為抗腫瘤免疫治療的腫瘤抗原主要來源，以腫瘤細胞來源的外泌體(tumor cell-derived exosomes，TEX)為基礎的抗腫瘤疫苗能在荷瘤小鼠模型中誘導腫瘤抗原特異性抗腫瘤免疫，對腫瘤生長具有明顯的抑制作用。K562、L1210等白血病細胞釋放的外泌體(leukemia cell-derived exosomes，LEX)同樣能在體內、外誘導一定的抗白血病免疫效應。

但LEX所誘導的抗白血病免疫效應仍然很低，難以達到臨床治療的抗白血病病強度，主要原因是LEX免疫原性低下。由于腫瘤細胞包括白血病細胞均低表達，甚至不表達共刺激分子，這也是腫瘤細胞免疫逃逸的主要機制，因此其分泌的LEX也低表達共刺激分子，從而導致LEX的免疫原性較低，難以誘導高效的抗白血病免疫。

發明內容

為了克服LEX缺陷，發明人進行了大量的研究探索，意外地發現：上調白血病L1210細胞表面共刺激分子CD80和/或CD86分子的表達，通過分離和純化其上清液，可獲得過表達CD80和CD86分子的LEX，其具有較高的免疫原性，從而完成本發明。

本發明一方面提供一種白血病細胞外泌體，所述白血病細胞外泌體是由經CD80和/或CD86過表達基因修飾的白血病細胞分泌的。

本發明第二方面提供本發明第一方面所述白血病細胞外泌體在制備癌癥疫苗中的應用。

在本發明的一些實施方案中，所述癌癥為腫瘤包括白血病。

本發明第四方面提供本發明第一方面所述白血病細胞外泌體的制備方法，該方法包括將負載CD80基因和/或CD86基因的載體轉染白血病細胞的步驟。

在本發明的一些實施方案中，所述載體為慢病毒載體。

在本發明的一些具體實施方案中，所述載體為pLenO-DCE Greenp或LenO-DCEpuro。

在本發明的實施方案中，所述CD80基因是利用具有SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的引物對擴增得到的。

在本發明的一些實施方案中，所述CD80基因具有SEQ ID NO.5所示核苷酸序列。

在本發明的實施方案中，所述CD86基因是利用具有SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的引物對擴增得到的。