[發(fā)明專利]一種用于早期賁門癌篩查ELISA試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910477639.1
• 申請日: 2019-06-03
• 公開（公告）號: CN110187111B
• 公開（公告）日: 2020-02-11
• 發(fā)明（設計）人: 王立東;王偉;宋昕;趙學科;徐瑞華;伍玥;王啟鳴
• 申請（專利權）人: 鄭州大學第一附屬醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 41155 鄭州翊博專利代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 周玉青;付紅莉

本發(fā)明屬于腫瘤醫(yī)學技術領域，具體公開了一種用于早期賁門癌篩查ELISA試劑盒，該試劑盒包括固相載體和包被在固相載體上的腫瘤相關抗原，所述腫瘤相關抗原由EYA4、ABL1、CD38、P53、NOTCH1和DLC1組成。進一步地，所述試劑盒還包括樣品稀釋液、第二抗體、第二抗體稀釋液、陽性對照血清、陰性對照血清、顯色液、終止液和洗滌液。本發(fā)明的ELISA試劑盒可以有效檢測賁門癌，尤其是早期賁門癌，其檢測靈敏度高達92.2%，特異性達到了79.6%，可用于賁門癌高發(fā)區(qū)無癥狀人群的大規(guī)模篩查，有利于無癥狀高危人群賁門癌篩查和早期發(fā)現(xiàn)。

技術領域

本發(fā)明涉及分子生物學和腫瘤學領域，具體涉及一種用于早期賁門癌篩查ELISA試劑盒。

背景技術

隨著社會的發(fā)展及生活環(huán)境的惡化，賁門癌已經成為嚴重威脅到人類生命健康安全的一類惡性腫瘤。賁門癌是指賁門解剖部位發(fā)生的癌癥，國內通常認為其位于食管胃交界處下方2cm內。在我國河南省林州市是中國食管癌高發(fā)地區(qū)之一，研究發(fā)現(xiàn)在食管癌高發(fā)地區(qū)同時存在賁門癌的高發(fā)。這一現(xiàn)象提示在當?shù)氐纳瞽h(huán)境中，可能存在較強的致癌因素，這些致癌因素長期作用于上消化道黏膜，通過一些相似的機制，既導致了食管癌高發(fā)，也導致了賁門癌的高發(fā)。

傳統(tǒng)上，“高發(fā)區(qū)、40歲以上、男性、吸煙、飲酒、家族史陽性的無癥狀人群”被籠統(tǒng)界定為“食管癌高危或高風險人群”，同時也是賁門癌早期篩查主要對象。目前,內鏡檢查和粘膜活檢、組織病理學檢查,特別是對高發(fā)區(qū)無癥狀居民普查和隨訪,仍然是發(fā)現(xiàn)早期賁門癌和癌前病變患者最有效的手段。但隨著篩查范圍擴大，這些方法暴露出一些問題，制約篩查進一步推廣。如內鏡篩查檢出率和現(xiàn)患率、被檢者的依從性、內鏡篩查技術及組織病理診斷水平都有密切關系。現(xiàn)有技術中缺乏有效對高危人群預警和早期診斷的生物學指標與方法，這是造成臨床上賁門癌患者就診時間過晚,死亡率高的主要原因。

賁門癌的發(fā)生發(fā)展是一個多因素、多階段、緩慢的發(fā)展過程,鄭州大學第一附屬醫(yī)院王立東教授領銜的研究團隊在實驗室研究和隨訪過程中發(fā)現(xiàn)，經內鏡活檢確定為賁門癌前病變的患者，這類人群的消化道黏膜可由不典型增生(癌前病變)再進一步轉化為癌；但是也有部分人群可在進展到某一階段時停止，不再向惡性進一步發(fā)展，甚至可從癌前病變轉為正常上皮組織，這一現(xiàn)象提示賁門癌前病變具有雙向發(fā)展的特性。同時賁門癌在發(fā)病過程中也存在有癌基因的激活和抑癌基因的失活,這些分子生物學的變化均促進了癌細胞的發(fā)生和發(fā)展。

近年來的研究發(fā)現(xiàn)，癌細胞在形成和發(fā)展過程中會合成并釋放出一組獨特的自分泌性抗原,即腫瘤相關抗原(Tumor-associated Antigen,TAA)。這些TAA可在正常組織中產生，但在腫瘤細胞上表達明顯增高。其中一些TAA已經應用于臨床輔助診斷，如甲胎蛋白已作為肝癌診斷的一項生物學指標、癌胚抗原(CEA)已作為早期診斷消化系統(tǒng)腫瘤特異性標志物。然而尚無賁門癌特異相關抗原試劑盒應用于臨床早期診斷。

本研究團隊在前期利用全基因組關聯(lián)分析、全基因組測序和全基因組外顯子測序等技術建立的基因組學數(shù)據(jù)庫的基礎上，應用自身抗體芯片技術篩選出6種TAA，這6種TAA分別為EYA4、ABL1、CD38、P53、NOTCH1、DLC1，而且這些TAA的自身抗體均與早期賁門癌和癌前病變有關。多個腫瘤相關抗原聯(lián)合檢測自身抗體的變化有利于對賁門癌無癥狀高危人群起到一定的預警作用。然而，針對賁門癌早期診斷的多種自身抗體聯(lián)合檢測方法以及相應試劑盒的應用還比較少見。因此，本研究提出一種可用于早期賁門癌診斷的ELISA試劑盒，可有效檢測賁門癌，尤其是檢測早期賁門癌。

發(fā)明內容

針對現(xiàn)有技術中存在的問題和不足，本發(fā)明的目的是提供一種用于早期賁門癌早期篩查的ELISA試劑盒。

為實現(xiàn)發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術方案如下：

腫瘤相關抗原EYA4、ABL1、CD38、P53、NOTCH1和DLC1的組合在制備用于賁門癌篩查的試劑盒中的應用。