[發(fā)明專(zhuān)利]一種基于RGO-CS-Fc/Pt NPs納米復(fù)合材料檢測(cè)膽固醇的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910476138.1
• 申請(qǐng)日: 2019-06-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110146578B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-09-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李桂銀;曾俊祥;周治德;梁晉濤;黃勇
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 桂林電子科技大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N27/48
• 分類(lèi)號(hào): G01N27/48;G01N27/327
• 代理公司: 桂林市華杰專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限責(zé)任公司 45112
• 代理人: 劉梅芳

1.一種基于RGO-CS-Fc/Pt NPs納米復(fù)合材料檢測(cè)膽固醇的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一：RGO-CS-Fc復(fù)合納米材料的制備

（1）將10 mg GO分散于10 mL超純水中，使用細(xì)胞超聲破碎儀超聲形成1mg/mL石墨烯的懸浮液，在離心機(jī)中以3000 r/min的速度離心，取上清液得到10 mL濃度為1 mg/mL的GO溶液；

（2）將100 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的水合肼與GO溶液混溶，水浴加熱，反應(yīng)4小時(shí)，以10000r/min的速度離心；取沉淀溶于超純水，得到10 mL濃度為1 mg/ml的RGO溶液；

（3）將1%的乙酸滴入0 .2 mg的殼聚糖中溶解成10 mL的溶液，向殼聚糖-乙酸溶液中加入2 mg二茂鐵甲酸、1 mL濃度為10 mM的EDC和4 mL濃度為10 mM的NHS溶液，攪拌4 h后，取10 mL濃度為1 mg/mL的RGO溶液混合，攪拌12 h，高速離心，轉(zhuǎn)速20000 r/min，時(shí)間30 min；除去上清液，重新分散于超純水中得到10 mL濃度為1 mg/mL的RGO-CS-Fc納米復(fù)合材料溶液，于4°C冰箱冷藏；

步驟二：RGO-CS-Fc/Pt NPs修飾的膽固醇酶電極的構(gòu)建

（1）絲網(wǎng)印刷電極的活化：將絲網(wǎng)印刷電極浸入5 mL濃度為0 .5 M的H₂SO₄溶液中，通過(guò)電化學(xué)以100 mV/s的掃描速度在為0 .2 V至1 V的電壓范圍循環(huán)掃描活化；

（2）金納米顆粒修飾：將活化后的SPCE電極浸入持續(xù)攪拌的5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0 .01%的HAuCl₄溶液中，通過(guò)電化學(xué)在-0 .5 V電位下進(jìn)行恒電位電沉積120s，在活化的SPCE表面沉積Au NPs，得到SPCE/ Au NPs 電極；

（3）敏感單元的修飾：將2 μL濃度為0 .4 mg/mL的RGO-CS-Fc溶液滴在SPCE/Au NPs的電極表面，在25℃恒溫條件下孵育30分鐘，使用超純水洗去未牢固結(jié)合的RGO-CS-Fc納米復(fù)合材料，晾干；然后將SPCE/Au NPs/RGO-CS-Fc電極浸入攪拌的5 mL分子質(zhì)量為0 .01%的H₂PtCl₆溶液中，通過(guò)電化學(xué)在-0 .5 V電位下進(jìn)行恒電位電沉積90 s，在活電極表面沉積PtNPs，使用超純水洗去殘留的H₂PtCl₆溶液，晾干，連續(xù)重復(fù)以上步驟三次；將2 .0 mL濃度為0.5 mg/mL的CHODCHER酶溶液滴到電極表面，在15°C恒溫的潮濕環(huán)境中孵育1小時(shí)，將CHODCHER吸附到電極表面，使用超純水洗去殘留的CHODCHER溶液，晾干；

步驟三：膽固醇工作曲線(xiàn)的繪制

將構(gòu)建好的傳感器電極置于2 mL濃度為0 .1 M的PBS，通過(guò)電化學(xué)工作站使用i-t測(cè)量方法在室溫下外加-0 .5 V的電位測(cè)量基線(xiàn)，當(dāng)曲線(xiàn)穩(wěn)定后，將10 μL標(biāo)準(zhǔn)膽固醇溶液加入PBS溶液中，記錄產(chǎn)生的電化學(xué)信號(hào)；在膽固醇濃度為0 .1-10mg/mL的范圍內(nèi)，傳感器電流響應(yīng)與膽固醇濃度呈良好的正相關(guān)線(xiàn)性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)為I=13 .76396 c+72 .29672；

步驟四：實(shí)際樣本中的膽固醇檢測(cè)

將構(gòu)建好的傳感器電極置于2 mL濃度為0 .1 M的PBS，再通過(guò)電化學(xué)工作站使用i-t測(cè)量方法在室溫下外加-0 .5 V的電位測(cè)量基線(xiàn)，當(dāng)曲線(xiàn)穩(wěn)定后，將10 μL血清樣本加入PBS溶液中，記錄產(chǎn)生的電化學(xué)信號(hào)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算膽固醇的濃度。