[發(fā)明專利]人工合成的透明顫菌血紅蛋白基因及相應(yīng)工程菌株和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910472992.0
• 申請日: 2019-05-31
• 公開（公告）號: CN110106191A
• 公開（公告）日: 2019-08-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 許向陽;魏東芝;魏巍;董鳳英;劉樂樂
• 申請（專利權(quán)）人: 棗莊市杰諾生物酶有限公司;華東理工大學
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N15/76;C07K14/805;C12P21/02;C12R1/465
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 鄭暄;豆欣欣

本發(fā)明涉及一種人工合成的透明顫菌血紅蛋白基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，記為vgbL。本發(fā)明還提供了相應(yīng)的用于生產(chǎn)恩拉霉素的基因工程菌株。本發(fā)明還提供了構(gòu)建用于生產(chǎn)恩拉霉素的基因工程菌株的方法。本發(fā)明的有益效果為：獲得可以在鏈霉菌中高效表達的新的透明顫菌血紅蛋白基因vgbL核苷酸序列，人工合成了此基因，并將此基因轉(zhuǎn)入殺真菌鏈霉菌ATCC21013中，與原始野生菌株相比，恩拉霉素的產(chǎn)量提高16.6％，因此可見vgbL能夠成為用來提高各種鏈霉菌中抗生素產(chǎn)量的有效手段。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及基因工程領(lǐng)域，具體是指一種人工合成的透明顫菌血紅蛋白基因及相應(yīng)工程菌株和應(yīng)用。

背景技術(shù)

鏈霉菌是放線菌中的一個重要的屬，它產(chǎn)生大多數(shù)已知抗生素及其他生物活性物質(zhì)，自然界約70％的抗生素是由鏈霉菌及其近緣放線菌產(chǎn)生的。恩拉霉素(enramycin)又名恩來霉素、安來霉素、持久霉素，由13個不同種類的17個氨基酸分子組成，氨基酸組成環(huán)狀多肽，脂肪酸分子連在末端的天冬氨酸上，根據(jù)末端氨基酸分子的不同分為恩拉霉素A和恩拉霉素B，恩拉霉素是這兩種組分的混合物。

恩拉霉素作為一種新肽類抗生素，其抗菌作用機理是是抑制細菌細胞壁的合成。細菌細胞壁主要是維持外形、保持滲透壓穩(wěn)定，其主要成分為粘肽，在革蘭氏陽性菌中，粘肽占細胞壁總量65％～95％。恩拉霉素能阻止粘肽的合成，使細胞壁缺損，導(dǎo)致細胞內(nèi)滲透壓升高，細胞外液滲入菌體，使細菌變形腫大，破裂而死亡。主要作用于細菌的裂殖階段，不僅殺菌，而且溶菌。最小抑菌濃度為0.05～3.13微克/毫升。

恩拉霉素對革蘭氏陽性菌有良好的抗菌作用，特別是對腸內(nèi)的有害梭狀芽孢桿菌抑制力很強，因此目前作為飼料添加劑使用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)。飼料中添加適量的恩拉霉素不僅可以預(yù)防常見的動物消化道疾病，還可改善動物腸道內(nèi)的群落平衡，有利于飼料營養(yǎng)成份的消化吸收，促進動物增重。同時，恩拉霉素具有廣譜、低毒、無殘留、不易產(chǎn)生耐藥性和交叉抗性等優(yōu)點，因此是目前少數(shù)幾種可用于飼料添加劑的抗生素之一，具有廣闊的市場前景。但是，目前恩拉霉素的生產(chǎn)主要由抗真菌素鏈霉菌(Streptomyces fungicidicus)發(fā)酵獲得，由于該菌株發(fā)酵周期長，產(chǎn)素水平低，限制了恩拉霉素的大規(guī)模生產(chǎn)和進一步的推廣應(yīng)用，因此，對恩拉霉素產(chǎn)生菌進行基因?qū)用娴木N改良以提高其產(chǎn)素水平及生產(chǎn)性能具有重要的研究意義和社會效益。