[發明專利]玉米秸稈高效降解真菌的分離與鑒定方法在審
| 申請號： | 201910463799.0 | 申請日： | 2019-05-30 |
| 公開（公告）號： | CN110129407A | 公開（公告）日： | 2019-08-16 |
| 發明（設計）人： | 李杰;楊萍;王田濤;楊若鵬;蘇一蘭;周銀麗 | 申請（專利權）人： | 紅河學院 |
| 主分類號： | C12Q1/04 | 分類號： | C12Q1/04 |
| 代理公司： | 北京卓特專利代理事務所(普通合伙) 11572 | 代理人： | 段宇 |
| 地址： | 661199 云南省紅河哈尼族*** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 高效降解 真菌 玉米秸稈 液態發酵培養基 篩選培養基 纖維素篩選 種子培養基 真菌篩選 剛果紅 菌種 秸稈 分子生物學鑒定 纖維素降解真菌 培養基篩選 瓊脂培養基 形態學鑒定 初步篩選 待測菌株 鑒定結果 建立系統 接種培養 菌種篩選 瓊脂培養 篩選培養 形態觀察 培養基 滅菌 活化 降解 菌株 篩選 發育 生長 | ||
1.玉米秸稈高效降解真菌的分離與鑒定方法，包括以下步驟：
S1：(1)選取樣品，設五個不同的取樣點,選取不同地區且不同腐解程度的玉米秸稈；(2)選取沒有腐解跡象的秸稈，自然晾干，粉碎后過40目的篩，將過篩粉末放于自封袋保存，使用前滅菌并烘干；
S2：接種培養，對所得樣品進行表面消毒，然后在超凈工作臺無菌條件下，將材料接種到PDA培養基，待微生物長出來后再進行多次培養活化；
S3：菌種篩選培養，真菌篩選培養基、剛果紅篩選纖維素瓊脂培養基、種子培養基和秸稈高效降解液態發酵培養基四個篩選培養基對多次活化得到的菌種進行篩選培養；
S4：纖維素降解真菌的初步篩選與生長形態觀察；
S5：分子生物學鑒定，將形態學鑒定得到的各菌株進行PCR檢測，對得到的結果建立系統發育樹從而更加準確的鑒定出待測菌株。
2.根據權利要求1所述的玉米秸稈高效降解真菌的分離與鑒定方法，其特征在于：將取得的材料用75％乙醇進行表面清洗與消毒1min，在超凈工作臺無菌條件下，分別接種到PDA培養基，在28℃條件下的恒溫培養箱培養。
3.根據權利要求1所述的玉米秸稈高效降解真菌的分離與鑒定方法，其特征在于：在進行菌種的生長習性和形態的觀察時，需要對從玉米秸稈分離純化微生物的整個過程進行記錄。
4.根據權利要求1所述的玉米秸稈高效降解真菌的分離方法，其特征在于：在PDA培養基中加入阿莫西林和1％的孟加拉紅水溶液。
5.根據權利要求1所述的玉米秸稈高效降解真菌的分離與鑒定方法，其特征在于：所述剛果紅纖維素篩選瓊脂培養基由剛果紅、瓊脂、明膠、CMC-Na、KH2PO4和MgSO4·7H2O組成，用蒸餾水定容，滅菌備用，自然pH值，使用前加100μl氨芐青霉素，且剛果紅篩選纖維素瓊脂培養基按照重量份數組成分別是：剛果紅0.2份、瓊脂15份、明膠2份、CMC-Na 1.88份、KH2PO40.5份和MgSO4·7H2O 4份。
6.根據權利要求1所述的玉米秸稈高效降解真菌的分離與鑒定方法，其特征在于：所述種子培養基由CMC-Na、蛋白胨、MgSO4·7H2O、KH2PO4和水組成，且牛種子培養基按照重量份數組成分別是：CMC-Na10份、蛋白胨3份、MgSO4·7H2O0.03份、KH2PO44份和水1000份。
7.根據權利要求1所述的玉米秸稈高效降解真菌的分離與鑒定方法，其特征在于：所述秸稈高效降解液態發酵培養基由已滅菌的玉米秸稈粉、(NH4)2SO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O、蛋白胨、牛肉膏和水組成，且秸稈高效降解液態發酵培養基按照重量份數組成分別是：玉米秸稈粉20份、(NH4)2SO4 4份、KH2PO42份、MgSO4·7H2O 0.5份、蛋白胨10份、牛肉膏5份和水1000份。
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