[發明專利]一種脫除T-2毒素的枯草芽孢桿菌

有效

• 申請號: 201910461134.6
• 申請日: 2019-05-30
• 公開（公告）號: CN110172426B
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 王喜亮;鞏英慧;曹漢文;李越;翟志雯;石德時;賀宇成;金秀娥
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23L5/20;C12R1/125
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

本發明屬于獸用微生物添加劑技術領域，具體涉及一種脫除T?2毒素的枯草芽孢桿菌。T?2毒素主要是三線鐮刀菌產生的單端孢霉烯族化合物之一，主要污染小麥和玉米等糧食作物，對畜禽飼料也造成較大危害。本發明從保留菌株中篩選到一株對T?2毒素脫毒型益生菌，即枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WXBs?05，該菌株保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:M2019177。本發明對該菌株進行了生理生化和分類鑒定，對其生物學特性、脫毒特性、脫毒產物以及脫毒效果進行了驗證。WXBs?05菌株生長速度快，抗逆性和抑菌效果較強，可在脫除T?2毒素的飼用微生物添加劑中應用。

技術領域

本發明屬于獸用微生物添加劑技術領域，與抗生素添加劑領域有關，本發明涉及一種對T-2毒素具有脫毒效果的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)菌株的篩選、鑒定、抑菌性能、抗逆性能、脫毒特性、脫毒物質及脫毒效果體內驗證。

背景技術

T-2毒素主要是由三線鐮刀菌產生的單端孢霉烯族化合物(trichothecenes，TS)之一廣泛污染世界各地的大麥、小麥等谷物，當前農業生產中霉菌毒素污染嚴重，污染范圍廣，動物采食毒素污染的飼料后造成動物源性食品存在的毒素殘留，會對人類的健康造成重大危害，因此T-2毒素帶來的危害和影響已引起各國決策層及科學界的關注。常用的脫毒方法主要為物理脫毒法、化學脫毒法和生物脫毒法，由于生物脫毒法在霉菌毒素脫除過程中具有脫毒效率高、無毒副作用、無污染的獨特優勢，受到了全世界廣泛的關注，因此尋找能夠脫除飼料中T-2毒素的優良菌株并最終開發出脫毒劑具有重大意義，為發酵飼料中霉菌毒素的脫除提供技術支持，為畜牧業綠色、健康發展提供幫助。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的存在的技術問題，通過篩選得到一種對T-2毒素具有脫毒效果的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)菌株。篩選出具有良好脫除T-2毒素并且可以作為飼料添加劑使用的益生菌菌株。本發明篩選出的益生菌菌株為一種對T-2毒素具有脫毒效果的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，本發明提供了枯草芽胞桿菌的篩選、鑒定、抑菌性能、抗逆性能、脫毒特性、脫毒物質的鑒定及脫毒效果的驗證應用。

本發明的技術方案如下所述：

本發明以T-2毒素類似物苯基環氧乙烷和玉米漿作為唯一碳源和氮源，對實驗室菌庫中的微生物進行了初篩，利用T-2毒素純品進行2次初篩，以兩者結果結合篩選出7株在T-2毒素環境下存活的優良菌株。對這7株菌株做進一步復篩，以T-2毒素為底物，用競爭性ELISA法檢測，最終篩選出脫毒率最高且最穩定的目的菌株WXBs-05。對所得的WXBs-05菌株進行了相關的生理生化和分類鑒定，將候選菌株WXBs-05鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)。

申請人將所得的對T-2毒素具有脫毒效果的菌株命名為枯草芽孢桿菌WXBs-05，Bacillus subtilis WXBs-05，于2019年3月20日送交中國.武漢.武漢大學中國典型培養物保藏中心保藏，保藏編號為CCTCC NO:M2019177。

枯草芽孢桿菌WXBs-05的菌學特征：

本發明的WXBs-05菌株在LB培養基上的生長特性見圖1，其革蘭氏染色特性見圖2，其孔雀綠染色特性見圖3。WXBs-05菌株在LB固體培養基上生長12h后菌落形態為圓形，白色微黃，邊緣不整齊，菌落濕潤。由革蘭氏染色及孔雀綠染色結果可發現WXBs-05為革蘭氏陽性菌，為長桿狀，無莢膜，為中生或近中生型芽胞。

枯草芽孢桿菌WXBs-05的生長特性、抑菌能力及抗逆性研究表明，該菌株繁殖能力很強，無遲緩期，很快進入對數期，2h后進入穩定期，對大腸桿菌K88、O157、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌有一定的抑菌能力，耐高溫、耐酸堿、耐膽鹽、耐胃酸能力較強。