[發(fā)明專利]一種三聯(lián)袋以及應(yīng)用三聯(lián)袋分離臍帶血造血干細(xì)胞的方法

在審

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• 申請日: 2019-05-29
• 公開（公告）號: CN110129179A
• 公開（公告）日: 2019-08-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 丁海雷;黃冠;成玉萍;孫三勇
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省北科生物科技有限公司
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;C12N5/0789;A01N1/02
• 代理公司: 北京中政聯(lián)科專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11489
• 代理人: 何浩

本發(fā)明建立一種三聯(lián)袋以及應(yīng)用三聯(lián)袋分離臍帶血造血干細(xì)胞的方法，本方法采用三聯(lián)袋的方式從臍帶血中分離出造血干細(xì)胞，三聯(lián)袋分離的整個操作過程在封閉無菌的環(huán)境內(nèi)完成，既可以減少操作過程的污染，同時對操作環(huán)境和人員的無菌要求低，便于操作；分離過程采用自動分漿夾去除血漿，速度快，操作簡單，提高了操作效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種三聯(lián)袋以及應(yīng)用三聯(lián)袋分離臍帶血造血干細(xì)胞的方法，屬于 臍帶血造血干細(xì)胞的提取的技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

造血干細(xì)胞(hemopoietic stem cell)是指一群尚未發(fā)育成熟的細(xì)胞，是所有 造血細(xì)胞和免疫細(xì)胞的起源，它不僅可以分化為紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板，還可 以跨系統(tǒng)分化為各種組織器官的細(xì)胞，具有自我更新、多向分化和歸巢(即定向 遷移至造血組織器官)的潛能，屬于多能干細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)造血干細(xì)胞可以治療 多種疾病，隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，造血干細(xì)胞移植目前已經(jīng)成為根治白血病等血液系 統(tǒng)疾病的主要手段，為人類戰(zhàn)勝疾病帶來了新的希望。

臍帶血是胎兒娩出后，殘留在胎盤和臍帶中的血液，通常是廢棄不用的。但 近幾十年的研究發(fā)現(xiàn)，臍帶血中含有可以重建人體造血和免疫系統(tǒng)的造血干細(xì)胞， 而且數(shù)量較多。因此，臍帶血已經(jīng)成為造血干細(xì)胞的重要來源，特別是無血緣關(guān) 系的造血干細(xì)胞的來源，也是非常重要的人類生物資源。目前從臍帶血中分離出 造血干細(xì)胞存在手工開放式操作污染概率高，環(huán)境要求高，操作復(fù)雜等問題；自 動分離系統(tǒng)具有簡單方便，但分離成本高的缺點(diǎn)，因此尋找一種操作過程污染概 率低，環(huán)境要求低，操作簡單，成本低的分離方法具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對上述問題，從而提出了一種三聯(lián)袋以及應(yīng)用三聯(lián)袋分離臍帶血造 血干細(xì)胞的方法。

具體的技術(shù)方案如下：

一種三聯(lián)袋，包括制備袋、血漿袋和凍存袋，其中，制備袋上分別設(shè)有第一 連接管、第四連接管和第五連接管；

第一連接管分別與第二管道和第三管道相連接，第一連接管上設(shè)有第一取樣 口，第二連接管與輸血穿刺器相連接，第三連接管與血漿袋相連接，第三連接管 上設(shè)有第二取樣口；

第四連接管與凍存袋相連接；

第五連接管與加凍存液口相連接；

第二連接管上設(shè)有第一夾子、第四連接管上設(shè)有第二夾子、第五連接管上設(shè) 有第三夾子、第三連接管上設(shè)有第四夾子。

應(yīng)用上述的三聯(lián)袋分離臍帶血造血干細(xì)胞的方法，包括以下步驟：

1)將三聯(lián)袋消毒后放入生物安全柜中，排凈血漿袋和凍存袋中的空氣，關(guān) 閉所有夾子；

2)將三聯(lián)袋的輸血穿刺器扎入采血袋的旋帽開口端并擰緊；

3)舉起采血袋，松開第一夾子，使采血袋內(nèi)血液流入制備袋內(nèi)，轉(zhuǎn)移完成 后關(guān)閉第一夾子，將制備袋放置在搖床上搖勻5min；

4)將準(zhǔn)備好的羥乙基淀粉通過第一取樣口注入制備袋后混勻；

5)用兩個充氣后的轉(zhuǎn)移袋將裝有臍帶血的制備袋夾住固定于離心杯中，配 平后放置于離心機(jī)內(nèi)離心50g，7min，10℃；

6)離心結(jié)束后，取出離心杯，再從離心杯中取出制備袋，用止血鉗夾住第 一夾子附近管道，倒掛靜置5min；

7)待分層清晰后，打開第一夾子，用止血鉗控制紅細(xì)胞流速，使紅細(xì)胞以 3-10ml/min的速度流入采血袋中，直至分層界面距離制備袋管口1cm處，夾住 止血鉗，關(guān)閉第一夾子，取下制備袋，熱合掉連接采血袋的管道；

8)把制備袋中的血液混勻，用兩個充氣后的轉(zhuǎn)移袋夾住制備袋固定到離心 杯中，配平后放置于離心機(jī)內(nèi)離心747g，15min，10℃；